基于SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯骨材料的研究

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目的制备和表征SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯骨材料,研究所制备材料的生物活性、降解行为以及对小鼠成骨细胞3T3E1体外活性的影响。方法采用物理法和SC-CO2(超临界CO2)法在氧化石墨烯(GO)上负载药物阿司匹林(ASA),通过紫外分光光度法(UV)测定GO中ASA含量,确定两种载药方法下最佳负载条件及最大载药量,以此得到最优制备条件下载药氧化石墨烯(GO-ASA)复合物。再采用电泳沉积技术在镁合金基体上复合钙磷-壳聚糖膜层、物理载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层和SC-CO2载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层,通过红外测试法(FT-IR)和X射线衍射(XRD)对三种膜层进行表征研究,通过扫描电子显微镜(SEM)观察三种膜层微观形貌。通过浸泡实验研究镁基钙磷-壳聚糖、物理载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林和SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林的体外生物活性和降解行为,采用CCK-8法检测不同材料浸泡液和膜层对小鼠成骨细胞3T3E1体外增殖情况的影响。结果物理法制备GO-ASA复合物的最佳载药参数为载药时间2 h、载药温度20℃,GO与ASA质量比为1:1,该条件下的载药量为0.0363 mg/mg;SC-CO2法制备GO-ASA复合物的最佳载药参数为载药压强20 Mpa、载药温度40℃、载药时间1 h,ASA/GO比值2:1,该条件下得到GO载药量为0.1210 mg/mg。镁基体上沉积的陶瓷膜层主要成分为HA和HCA,SC-CO2载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层载药量高于物理载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层。SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林材料在m-SBF中浸泡0周到6周时,膜层中HA和HCA的沉积过程大于溶解过程;当浸泡6周到12周时,膜层中HA和HCA的溶解过程占主导。SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林材料在m-SBF中浸泡1周到6周时,其腐蚀反应受电化学和有限层扩散过程控制,同时伴随基体上腐蚀产物的吸附和脱落;浸泡8周时,受电化学和有限层扩散过程控制;浸泡10周到12周时,受电荷转移过程和半无限扩散过程控制。细胞增殖实验结果表明,镁基钙磷-壳聚糖、物理载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林和SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林的浸泡液含量均为50%、浸泡时间为2周时细胞增殖率最高;当浸泡液作为细胞培养液时,镁基钙磷-壳聚糖浸泡液的培养时间达到20 h时最大增殖率为46%,物理载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林和SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林浸泡液的培养时间为24h时,细胞增殖率均达到最大,分别为55%和71%;膜层作为细胞生长基体,钙磷-壳聚糖膜层组、钙磷-壳聚糖-石墨烯膜层组、物理载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层组和SC-CO2载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层组的细胞增殖率随培养时间均呈增加趋势,当培养时间为48h时,四种膜层的细胞增殖率分为别71%、78%、142%和185%;对于物理载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层组和SC-CO2载药的钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林膜层组,培养时间延长到3 d时,细胞增殖率可达152%和192%。结论采用SC-CO2技术载药与物理法载药相比时GO载药量显著提高,这是因为SC-CO2具有高扩散性、气液界面消失等特点利于负载药物。所制备的SC-CO2载药的镁基钙磷-壳聚糖-石墨烯/阿司匹林骨材料的生物活性优良和降解速度适宜,并对小鼠成骨细胞3T3E1增殖起到促进作用,具有成骨性。
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