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我国石蒜属植物不仅种类繁多,而且具有丰富的花色、花型变异。其中长筒石蒜种内变异最为丰富。以cDNA文库为基础的ESTs(Expressed Sequence Tags,表达序列标签)技术是一种快速地进行基因功能分析及发现新基因的有效方法。为了开展识别和分离花色、花型相关基因研究,本文构建了长筒石蒜的花瓣cDNA文库,并以该文库为材料进行大规模的5’端EST测序和生物信息学分析。本研究获得的主要结果如下:1.以采用改良的异硫氰酸胍法从长筒石蒜花瓣中提取总RNA法,分离纯化富含Poly A的mRNA,经反转录酶反转录合成双链cDNA,通过胶纯化回收法筛选出其中大于500bp的片段与载体pBluescript连接,最后用电转化法转化宿主菌ElectroMAXDHl0B,构建了长筒石蒜花瓣初级cDNA文库。经质量检测,初级文库的库容为1.12×106个/mL,符合高质量文库的要求。文库的重组率为96.8%,且插入片段的长度在0.8～3.0 kb之间,说明文库是完整、有效的,可以用于大规模EST序列测定及数据分析。2.从长筒石蒜花瓣初级cDNA质粒文库中随机选取3676个克隆进行测序,经Phred软件进行编辑后,获得长度大于100bp的有效序列为3584条,其序列的平均长度为449bp,序列平均质量数为37.06;另外通过GC含量分析获得长筒石蒜花瓣EST的GC含量为45.28%3.利用Phrap软件对长筒石蒜花瓣3584条有效EST序列进行片段重叠群分析和拼接后共获得2764个独立基因(Unigene),其中包括431个片段重叠群(Contig)和2333个独立的ESTs(Singlet)。4.随机测序所获得的同一基因的EST的数目可以在一定程度上代表该基因在该组织中的表达丰度。有效序列BIastX分析表明,丰度较高的基因(表达频率≥5)有42个,约占总数的9.039%;中等丰度基因(表达频率在2～5之间)113个,约占总数的25.871%;其余低丰度的基因约占65.09%。这说明在长筒石蒜花瓣基因中,高丰度表达基因比较少,大多数呈中低丰度表达。5.所有有效序列与NCBI的核酸数据库进行BLAST比对,有28.99%(1039/3584)的序列显示了与已知序列高度的同源性;而与蛋白质数据库进行比对时有62.27%(2232/3584)的序列显示了与已知序列的同源性。6.根据SWISSPORT数据库注释的ACCESSION,将独立基因(Unigene)以Gene Ontology进行功能分类。1917个具有同源性匹配的序列(被注释)的基因中,按照GO的分子功能、生物过程和细胞组分分三个不同分类角度分类,被赋予功能的基因累计达到2256个(包括一因多效)。把通过B1astX比对获得长筒石蒜花瓣有功能描述基因(包括功能确定的及推测功能的)分为11类,即代谢相关基因(Metabolism)的EST数量占有功能描述基因的26.42%、蛋白质合成相关基因(Protein synthesis)的EST占功能描述基因的21.28%、能量代谢相关基因(Energy)占17.24%、细胞内运输相关基因(Transporters)占