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【目的与背景】3-羟-3-甲-戊二酰辅酶A(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A,HMG-CoA)还原酶是肝脏和其他组织胆固醇合成的限速酶,在胆固醇合成过程中起重要的作用。阿伐他汀(atorvastatin)是HMG-CoA还原酶的抑制剂,被广泛应用于高胆固醇血症和高甘油三酯血症的治疗。体外研究表明:阿伐他汀的代谢与CYP3A有关,CYP3A4是阿伐他汀代谢的主要代谢酶。在人肝微粒体中,80%以上的阿伐他汀是由CYP3A4/5所代谢,同时它又是药物转运体P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的底物。P-gp是多药耐药相关蛋白成员之一,由多药耐药基因(Multidrug-resistance,MDR1)编码。不同个体间药物代谢酶和转运体活性的差异,可能是导致阿伐他汀降脂疗效差异的主要原因。国外文献报道阿伐他汀降脂疗效可能与CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性有关,但是尚未见中国汉族人群中CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性与阿伐他汀降脂疗效相关性的报道。因此,本研究旨在检测高脂血症病人中CYP3A4(CYP3A4~*18B)、CYP3A5(CYP3A5~*3)和MDR1(C3435T)的等位基因突变率,观察CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性对阿伐他汀降脂疗效的影响。本研究为基因导向的高脂血症病人的合理化和个体化用药提供了重要的基础和理论依据。【材料与方法】1.研究对象221例中国汉族高脂血症病人(甘油三酯(TG)>1.78mmol/l或总胆固醇(TC)>6mmol/l或低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)>3.36mmol/l或高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)<0.82mmol/l)均为2005年11月~2006年8月郑州大学第一附属医院和平顶山市第一人民医院的住院和门诊病人,平均年龄53±7.9岁,其中男性92例,女性119例,身体健康,肝肾功能正常,非B型或C型肝炎患者,给药前两周内未服用其他降血脂药物。本次研究方案得到郑州大学医学伦理委员会认可。2.基因型检测高脂血症病人抽取外周静脉血2-3ml,用酚-氯仿法提取基因组DNA;采用PCR-RFLP(聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析)技术,对CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T多态性位点进行检测分析。通过PCR扩增产物直接测序验证基因型检测方法的可靠性。3.阿伐他汀降脂疗效的评价高脂血症病人每日口服20mg的阿伐他汀,连续用药四周。在给药前、给药后采集病人空腹静脉血,测定血清TG、TC、LDL-C和HDL-C浓度。用给药4周后TG、TC、LDL-C和HDL-C的改变比例作为评价阿伐他汀降脂疗效的标准。根据基因型分型结果将病人分组,观察CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性与阿伐他汀降脂疗效的关系。4.统计学分析统计数据采用mean±SD表示,根据高脂血症病人基因型将高脂血症病人分成野生型纯合子、突变型杂合子和突变型纯合子三组。使用SPSS10.0软件以x~2检验检测等位基因和基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡;用x~2检验或Fisher’s精确概率检验检测不同种族间基因多态性分布的差异;对数据进行单因素方差分析(ANOVA),各组间比较采用LSD法。以P<0.05作为差别有统计学意义的检验标准。【结果】1.高脂血症病人中CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T的等位基因突变率CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T等位基因在高脂血症人群中的突变率分别为27.9%、73.7%和39.9%,等位基因和基因型分布符合Hardy-weinberg平衡。CYP3A4~*18B在高脂血症人群的突变频率与日本人群一致(24.9%)(P>0.05)。CYP3A5~*3在高脂血症人群的突变频率也与日本人群相似(76.8%)(P>0.05),但明显低于白种人群(91.7%)(P<0.05),高于黑种人群(47.5%)(P<0.05)。MDR1C3435T在高脂血症人群的突变频率显著低于居住在英国的白种人群(48%)(P<0.05)和居住在东南亚的亚洲人群(66%)(P<0.05),而显著高于黑种人群的突变频率(16%)(P<0.05)。2.CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性对阿伐他汀降脂疗效的影响221例高脂血症病人每天口服20mg阿伐他汀,连续四周后,比较CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T等位基因对阿伐他汀的降脂疗效,结果显示:CYP3A4~*18B/~*18B组TC的降低明显优于CYP3A4~*1/~*1组(P<0.01)和CYP3A4~*1/~*18B组(P<0.01),CYP3A4~*1/~*18B组TC的降低也明显优于CYP3A4~*1/~*1组,二组之间存在显著性差异(P<0.05)。CYP3A4~*18B/~*18B组HDL-C升高的比例明显优于CYP3A4~*1/~*18B组(P<0.05),但与CYP3A4~*1/~*1组相比无显著性差异(P>0.05)。CYP3A5~*3和MDR1C3435T各基因型组之间TG、TC、LDL-C和HDL-C的改变均无显著差异(P>0.05)。3.CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T构成的单倍体对阿伐他汀疗效的影响CYP3A4/CYP3A5构成单倍体时,携带CYP3A4~*18B/CYP3A5~*3者(CYP3A4~*1/~*18B或CYP3A4~*18B/~*18B,CYP3A5~*1/~*3或CYP3A5~*3/~*3)TC降低比例明显优于携带CYP3A4~*1/CYP3A5~*3者(CYP3A4~*1/~*1,CYP3A5~*1/~*3或CYP3A5~*3/~*3)和携带CYP3A4~*18B/CYP3A5~*1者(CYP3A4~*1/~*18B或CYP3A4~*18B/~*18B,CYP3A5~*1/~*1),经统计处理有显著差异(P<0.05)。CYP3A4/MDR1构成单倍体时,携带CYP3A4~*18B/MDR13435T者(CYP3A4~*1/~*18B或CYP3A4~*18B/~*18B,CT或TT)TC降低比例明显优于携带CYP3A4~*1/MDR13435T者(CYP3A4~*1/~*1,CT或TT),二者比较存在显著差异(P<0.05)。CYP3A5/MDR1构成单倍体时,携带CYP3A5~*3/MDR13435T者(CYP3A5~*1/~*3或CYP3A5~*3/~*3,CT或TT)与携带CYP3A5~*3/MDR13435CC者(CYP3A5~*1/~*3或CYP3A5~*3/~*3,CC)或携带CYP3A5~*1/MDR13435T者(CYP3A5~*1/~*1,CT或TT)相比,TG、TC、LDL-C和HDL-C的改变比例均无显著差异(P>0.05)。【结论】1.CYP3A4~*18B、CYP3A5~*3和MDR1C3435T等位基因在高脂血症人群中的突变率分别为27.9%、73.7%和39.9%。2.携带CYP3A4~*18B对阿伐他汀降脂疗效明显增强。而CYP3A5~*3和MDR1C3435T基因多态性对阿伐他汀降脂疗效均无明显的影响。3.CYP3A4/CYP3A5构成单倍体时,CYP3A4~*18B/CYP3A5~*3交互作用可增强阿伐他汀的降脂疗效。CYP3A4/MDR1构成单倍体时,CYP3A4~*18B/MDR13435T交互作用也增强阿伐他汀的降脂疗效。而CYP3A5/MDR1构成单倍体时对阿伐他汀的降脂疗效无明显影响。