油橄榄叶中三种活性成分含量动态变化及橄榄苦苷的分离鉴定与活性研究

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油橄榄(Olea europaea L.)为木犀科(Oleaceae)木犀榄属(Olea)常绿乔木,是世界上著名的亚热带木本油料树种。不仅其果富含高不饱和脂肪酸的油脂和丰富的酚类物质,且叶中含有与果实类似甚至含量更高的活性酚类物质,具有重要的研究前景和应用价值。由于我国油橄榄种植起步较晚,目前对其研究主要集中在种质资源和果实方面,而对其叶的研究和利用相对更加滞后。在油橄榄种植地,每年修剪和采摘果实季节产生的大量枝叶绝大多数被废弃,造成资源浪费。为此,本文对西昌油橄榄叶中总酚、总黄酮和橄榄苦苷的含量动态变化以及橄榄苦苷的分离、鉴定和体外活性进行了研究,为油橄榄品种的选育及油橄榄叶的综合开发利用提供参考,这对提高果农的生产收益,促进我国油橄榄产业的健康发展具有重要意义。其主要研究结果如下:1.采用福林酚法、三氯化铝法和紫外-可见光谱差减法分别测定了西昌29个油橄榄品种叶中总酚、总黄酮和橄榄苦苷一年内不同时期的含量。结果表明,不同品种不同月份间油橄榄叶中总酚、总黄酮和橄榄苦苷含量差异较大:全年内,坦彩的总酚含量最高(37.20%),同时也出现含量最低(14.20%)的品种,但巴利亚的年平均含量最高(30.06%);切姆阿尔的总黄酮含量最高(1.39%),云台最低(0.30%),但奥托卡的年平均含量最高(0.82%);小苹果的橄榄苦苷含量最高(19.57%),美兰开最低(1.56%),但巴利亚的年平均含量最高(13.64%)。全年内,29个油橄榄品种叶中总酚于1月份含量最高,9月份含量最低;橄榄苦苷在1月份含量最高,7月份含量最低;总黄酮在4月份含量最高,7月份含量最低。总体变化趋势为冬春季含量偏高,夏秋季含量偏低。2.分别以80%甲醇、80%乙醇、丙酮、乙酸乙酯、水作为提取溶剂,采用超声波辅助法对油橄榄叶中活性成分进行提取,并对各溶剂提取物的体外活性和化学成分进行了分析。结果表明:各溶剂提取物均具有较强的抑菌和抗氧化活性,其中80%甲醇提取物的抑菌和抗氧化活性均最强,乙酸乙酯提取物的抗氧化活性最弱,而水提取物的抑菌活性最弱。经液相色谱-质谱法(LC-MS)分析显示:水提取物和醇提取物中化合物种类较多,而丙酮提取物和乙酸乙酯提取物中化合物较少。在各溶剂提取物中均含橄榄苦苷和Ligstroside 2种成分,除水提取物外其他溶剂提取的橄榄苦苷含量较高,而水提取物中特有脱乙酰-10-羟基橄榄苦苷甘元和10-羟基橄榄苦苷2种物质。3.以80%甲醇为提取溶剂,采用超声波辅助法对油橄榄叶进行提取,提取液依次经过石油醚和乙酸乙酯多次萃取、浓缩、硅胶柱层析、再浓缩、真空干燥,获得橄榄苦苷纯样;经紫外可见光谱(UV)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)和质谱(MS)分析,以橄榄苦苷标准品为对照,确定提纯样品为橄榄苦苷。HPLC分析显示,纯样品得率为13.52%,样品纯度达96.54%,纯化率为78.49%。4.以Vc和BHT作为阳性对照,采用5种方法综合评价橄榄苦苷的体外抗氧化活性。结果显示:橄榄苦苷具有较强的抗氧化活性,其活性紧次于Vc,且总抗氧化能力、总还原能力和亚硝酸盐清除能力均强于BHT,而自由基清除能力与BHT相当。因此,橄榄苦苷可以作为更好的、安全的、天然的抗氧化剂、食品添加剂或者防腐剂等广泛被开发和应用。5.采用滤纸片法考察了橄榄苦苷对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑制作用,用稀释法分析了橄榄苦苷对这3种细菌生长曲线的影响及其最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:橄榄苦苷具有较强的抑菌活性,对大肠杆菌抑制作用最强,MIC为0.025mg/mL;其次为金黄色葡萄球菌,MIC为0.05mg/mL;对枯草芽孢杆菌抑制作用最弱,MIC为0.4mg/mL。橄榄苦苷对3种细菌生长曲线的影响均表现为抑制或延缓细菌的快速生长期。
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