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本论文采用2216E培养基,对大连养殖河豚鱼肠道可培养细菌进行分离,通过细菌形态和16S rDNA分子生物学相结合的方法对分离纯化的细菌进行鉴定和通过构建细菌16S rDNA克隆文库的两种不同方法对养殖河豚鱼肠道细菌多样性进行分析。采用2216E培养基,对大连养殖河豚鱼肠道可培养细菌进行分离与鉴定,并通过细菌形态和16S rDNA分子生物学相结合的方法对分离纯化的细菌进行鉴定,从而了解大连养殖河豚鱼肠道可培养细菌的菌群组成。结果表明,从河豚鱼肠道中分离纯化了 12株细菌,鉴定出的结果分别是:绿脓杆菌(Pseudomonas azotoformans),谢瓦纳拉杆菌(Shewanella putrefaciens),解鸟氨酸拉乌尔菌(Raoultella terriqena),销氨醇杆菌(Sphinqobacterium sp.),拟杆菌(Bizionia sp.),菲达利丝希瓦氏菌(Shewanella fidelis),蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri),肠道弧菌(Vibrio scophthalmi),费希尔氏弧菌(Aliivibrio sp.),苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),哈氏弧菌(Vibrioharveyi sp.)。从养殖河豚鱼肠道内容物中提取细菌基因组DNA,通过PCR和TA克隆构建了细菌的16S rDNA基因文库研究肠道内容物细菌的多样性。构建16S rDNA克隆文库,共挑取100个阳性克隆子,经Hinf Ⅰ和HaeⅢ酶切分析后,将有60个PCR产物进行序列测定,最终确定29个可操作分类单元(OTUs)。克隆文库库容覆盖率Coverage C值为71%,结果表明,大部分序列通过NCBI数据库的BLAST搜索发现相似率从88%到99%,共有8个OTUs的序列相似率小于98%,鉴定出4类系统发育菌群,分别是变形菌门γ亚群(Gamma-proteobacteria,44.8%)、CFB 菌群细菌(Cytophaga-Flexibacter-Bacteroides,6.9%),厚壁菌门(Firmicutes,13.8%)、Unclassified group(34.5%),其中变形菌门γ亚群为肠道内容物中的优势细菌类群。文库多样性分析结果显示养殖河豚鱼肠道内容物中有着丰富的细菌多样性群落。养殖河豚鱼肠道细菌分属于13个菌属,分别为:Vibrio,Psychrobacter,Pseudomonas,Bacillus,Staphylococcus,Aliivibrio,Raoultella,Exiguobacterium, Weissella,Sphingobacterium,Bizionia和Mycoplasma,uncultured bacterium,其中Vibrio,Shewanella和Photobacterium为养殖河豚鱼肠道细菌中的主要菌属。