EPO基因的克隆及昆虫杆状病毒表达系统的建立

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利用逆转录酶RTase从人胎肝mRNA中逆转录得到cDNA,通过re-PCR扩增DNA片段,经计算机DNASIS分析已知EPO基因保守区段的限制性内切酶位点,选择BamHI和HincⅡ进行酶解,初步确认所得DNA片段为EPO基因.所得的EPO基因希望通过昆虫杆状病毒表达系统得到表达,进而进行大规模生产EPO,最终实现商品化.该系统能够有效表达来源于真核动植物、酵母、原核生物等的外源基因.大多数情况下,其产物具有与哺乳动物的细胞产物相同的生物活性和免疫效力,而且相对产量较高,花费较低.本实验成功地建立了该表达系统,并对Sf9昆虫细胞培养,BacPAK6病毒繁殖,效价测定等实验进行了改进和优化,为进行克隆的EPO基因和其它目的片段的表达做了较全面的基础工作.
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