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抗生素在养殖业的滥用,导致耐药菌株增加、畜禽肠道菌群紊乱、动物免疫力下降等。益生菌作为抗生素的有效替代品,具有无污染、无耐药性和无药物残留的优点,已广泛应用于畜牧水产养殖业领域。因此开发高效的益生菌是当务之急。屎肠球菌是人和动物肠道正常菌群的组成部分,具有较强的调节肠道菌群平衡功能,已被农业部列入可直接饲用的微生物品种。1菌株发酵上清液体外抑菌试验初筛本研究通过PCR扩增屎肠球菌种特异性片段ddlE.faecium的方法,确定本实验室分离的76株菌为屎肠球菌。菌株发酵液上清对病原指示菌的抑菌试验发现,76株屎肠球菌均有不同程度的抑菌活性,其中XC2和WH10菌株对指示菌大肠杆菌K88以及猪霍乱沙门氏菌的抑菌效果均显著高于对照菌株TC3(p<0.05)。2益生屎肠球菌XC2和WH10的安全性评价(1)毒力基因cylA、gelE、esp、as、ace、efaAfm的PCR扩增结果显示,XC2和WH10菌株只含有efaAfm。(2)抗生素敏感性试验结果显示,XC2和WH10菌株对包括万古霉素在内的大部分抗生素敏感。(3)急性口服毒性试验结果显示,与对照组相比,分别灌服屎肠球菌XC2和WH10的试验组小鼠,行为、精神状态、皮毛光泽等均无异常,未出现中毒和死亡现象,脏器组织结构完整。因此,屎肠球菌XC2和WH10均为非致病性菌株。3益生屎肠球菌XC2和WH10的生物学特性评估(1)生长特性的测定结果显示,XC2和WH10菌株迟缓期很短,很快进入对数增长期,8h后进入稳定期,适合于工业化生产。(2)耐受性试验结果表明,XC2和WH10菌株可以耐受pH2.5的人工胃液、pH6.8的人工肠液、0.3%的胆盐浓度以及70℃的高温。(3)粘附性试验结果显示,XC2菌株对细胞IPEC-J2的粘附率(7.62±0.16%)显著高于WH10菌株对细胞IPEC-J2的粘附率(3.54±0.47%)(P<0.01)。(4)粘附抑制性试验结果显示,XC2菌株对大肠杆菌K88的竞争抑制率、排斥抑制率和置换率分别为91.8%、73.9%和3.0%;WH10菌株对大肠杆菌K88的竞争抑制率、排斥抑制率和置换率分别为82.0%、82.1%和22.4%,说明两者均可有效抑制致病性大肠杆菌K88的粘附。以上结果表明,本试验筛选的屎肠球菌XC2和WH10,具有抑菌效果好、安全性高、繁殖速度快且抗逆性强的优点,为开发具有自主知识产权的高效微生态制剂提供了坚实的物质基础。