阿魏酸酯酶是一类可降解植物细胞壁阿魏酸与木质素及阿拉伯半糖相连的酯键的水解酶。能很好的解聚细胞壁，促进木聚糖酶、阿拉伯糖苷酶等纤维素酶对细胞壁的降解作用。阿魏酸酯酶可应用于造纸、纺织、饲料、食品等轻工行业。本文采用阿魏酸乙酯平板法从土壤和实验室菌种库中筛选出3株产阿魏酸酯酶的丝状真菌。分别编号为SD01、SD02和SD03，对3株菌分别进行形态学观察并进行了18SrDNA序列及ITS序列的克隆。菌株SD01长势迅速，菌丝与培养基结合紧密呈墨绿色，菌落表面湿润，孢子梗分生孢子不超过3个，孢子弯如新月，内有3隔室由内向外逐步膨大，孢子隔膜较厚。菌落、孢子形态结合ITS序列鉴定，该菌株为谷子弯孢菌（cochliobolus lunatus）。菌株SD02生长迅速，菌丝蔓延性强，在PDA培养基上开始呈现白色绒毛状，逐渐长出金黄色孢子后期孢子转为黄绿色，孢子蓬松易脱落。孢子头端部膨大，分生孢子沿着次生小梗均匀排列呈现两排。菌丝外侧有绒毛，内部有隔膜，是典型的黄绿曲霉特征。结合18S rDNA及ITS序列对比分析结果，认定菌株SD02为黄曲霉（Aspergillusflavus）。菌株SD03生长迟缓，需要2周分生孢子方铺满平板。菌丝致密，在PDA平板上初期白色，后逐渐分化出土褐色孢子，孢子松散易脱落。菌落边缘呈锯齿状，整体呈现螺纹状。菌落、孢子形态结合18S rDNA及ITS序列，认定菌株SD03为：土曲霉（Aspergillus terreus）。本文以土曲霉SD03作为出发菌株，采用PCR扩增得到土曲霉SD03的阿魏酸酯酶基因序列，序列分析显示其中包含两个外显子和1个内含子，总长度为787bp。采用重叠拼接PCR将其编码阿魏酸酯酶基因的两个外显子进行拼接，获得阿魏酸酯酶DNA序列，测序显示阿魏酸酯酶DNA序列长度为723bp，共编码341个氨基酸，其中和NCBI报道的土曲霉阿魏酸酯酶蛋白序列有两个氨基酸的差异，分别是120位的缬氨酸和第121位丝氨酸。利用EcoRI+Avr II双酶切将土曲霉SD03的阿魏酸酯酶DNA基因插入到表达载体pPIC9K中成功获得了毕赤酵母表达载体pPIC9K-fae，表达载体的成功构建为下一步的表达奠定了基础。表达载体pPIC9K-fae，分别经Sal I和Bgl II线性化，利用电转化法和化学转化法进行转化，转化子长出后涂布在G418梯度平板(最高浓度6mmol/L)进行抗性筛选，结果筛出获得64株高抗性转化子。对64株转化子进行试管诱导发酵试验，依据发酵液在阿魏酸乙酯平板上产生透明圈的情况筛选出16株有明显透明圈的转化子。利用pPIC9K表达盒引物及fae基因特异引物对其进行PCR鉴定筛选，结果获得6株转化子。对筛选获的6株pPIC9K-fae毕赤酵母转化子进行发酵性能研究，在甲醇诱导的发酵培养基中培养4d后发酵活力达到最高，以对硝基阿魏酸苯酚酯为底物，利用UV法410nm下测定对硝基酚的吸收值变化量，来测定转化子发酵液的酶活，其中转化子G3菌株的发酵液活性最高，可达12U/L。对G3菌株的发酵上清进行SDS-PAGE的电泳分析，结果在分子量大小32Kda左右有1条明显的条带。对土曲霉阿魏酸酯酶基因的外源表达有助于提高阿魏酸酯酶的活性。