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肺癌已占据全球癌症死亡的首位,发病率和病死率逐年上升,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占肺癌总数的80%,其恶性度高,对放疗、化疗不敏感,5年生存率不足15%。青蒿素是从青蒿叶中提取的有效抗疟成分,是我国首先发现的新构型的抗疟药。双氢青蒿素(DHA)是一种青蒿素类药物中活性较强的衍生物,是由青蒿素经四氢硼钠还原而成[1],具有独特的过氧桥结构。由于DHA具有吸收良好、分布广、排泄和代谢迅速、高效、低毒等优点,而且其口服生物利用度高,抗疟疾作用也是青蒿素的4～8倍[2],因此受到越来越广泛的关注。近年来研究发现,DHA除可抗疟疾外,在体内、外均具有抗肿瘤作用。对不同组织来源的培养肿瘤细胞进行检测发现,DHA对白血病、黑色素瘤、结肠癌、前列腺癌和乳腺癌细胞株高度敏感[3]。本研究拟探讨双氢青蒿素对NSCLC细胞株中肺腺癌A549细胞增殖和侵袭、转移能力的抑制作用,旨在为双氢青蒿素的临床应用提供理论依据,为NSCLC的治疗提供新的思路。本实验分为如下两个部分:第一部分:双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞体外增值和凋亡能力的影响目的:研究双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞体外增殖和凋亡能力的影响。方法:1.四唑氮蓝比色试验(MTT)检测双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的体外增殖抑制作用。2.流式细胞仪检测双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞周期影响。3.应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。结果:1.双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549有明显的体外增殖抑制作用,72h的IC50值为580nmol/L,而且随双氢青蒿素剂量的增大和作用时间的延长,抑制作用明显增强,即有明显的时间和剂量依赖关系。2.随着双氢青蒿素作用剂量加大,细胞周期发生改变,G0/G1期细胞明显增加,说明双氢青蒿素可以引起A549细胞周期阻滞。A549细胞经0、250、500、750 nmol/L双氢青蒿素作用后,G0/G1细胞比例为33.71%、49.26%、57.03%、72.04%,其中药物组明显高于对照组(P<0.01)3.透射电镜从形态学上证实双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变,580nmol/L双氢青蒿素处理A549 48h后,出现了早期凋亡细胞的形态的改变:细胞内出现空泡变性,内质网扩张,有出芽现象;典型的凋亡细胞:表现为外形不规则,体积明显缩小,胞浆浓缩,核碎裂,染色质边缘化、染色质浓集。结论:1.双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。2.双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞的抑制作用与其诱导细胞周期阻滞有关。3.双氢青蒿素作用人肺腺癌A549细胞后可以出现凋亡的形态学变化,即双氢青蒿素可以诱导A549细胞发生凋亡。第二部分:双氢青蒿素对裸鼠肺癌生长转移及MMP-9表达的影响目的:观察不同剂量双氢青蒿素对小鼠肺癌生长转移及MMP-9表达的影响。方法:1.将造模成功的肺癌小鼠,分别灌服不同剂量(25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg)的双氢青蒿素,对照组灌服等量蒸馏水,治疗共4周,观察小鼠重要脏器及淋巴结转移情况和移植瘤的重量。2.检测小鼠移植瘤的基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。结果:1.双氢青蒿素各剂量组对小鼠瘤重和体积均有抑制作用,与蒸馏水组比较,双氢青蒿素二组、双氢青蒿素三组差异有显著性意义(P<0.01),双氢青蒿素一组差异无显著性意义(P>0.05)。裸鼠重要脏器及淋巴结解剖后连续切片观察未发现肿瘤体内转移。2.与对照组相比较,各剂量组均能明显抑制小鼠移植瘤MMP-9的表达(P<0.01)。结论:1.高剂量双氢青蒿素对小鼠肺癌移植瘤有明显的抑制作用;2.双氢青蒿素能抑制小鼠移植瘤MMP-9表达。