布鲁菌MLVA和HOOF分型标准操作方法的建立及应用

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目的:1.建立MLVA分型和HOOF分型的标准操作方法,作为布鲁菌流行病学监测工具。2.应用MLVA和HOOF分型方法检测内蒙地区1983年-1997年分离的牛种布鲁菌的分型。方法:1.用DNA提取试剂盒提取16株布鲁菌标准菌株和67株内蒙地区1983年-1997年分离的牛种布鲁菌的脱氧核糖核酸。2.设计并合成MLVA和HOOF分型方法的引物。3.聚合酶链反应(PCR)扩增标准菌株和地方株。PCR产物MLVA panel1采用琼脂糖凝胶电泳分辨条带测序;MLVA panel2和HOOF采用毛细管电泳技术测序。4.计算串联重复数,整理成Excel表格,结合BioNumerics (Version5.0)软件,对布鲁菌菌株进行MLVA和HOOF分型分析,得出树状图。5.建立布鲁菌的MLVA分型和HOOF分型的标准操作方法。结果:1.利用布鲁氏菌的标准菌株建立了MLVA和IOOF分型的标准化方法。2.利用所建立的MLVA和HOOF分型方法可以对内蒙古地方布鲁菌株进行鉴定。3.将16株标准菌株和53株内蒙牛种菌MLVA和HOOF分型的结果分别建立数据库。结论:1.初步建立了MLVA和HOOF分型标准化操作方法,可以在种的水平鉴定布鲁菌。2. MLVA和HOOF分型方法可以作为流行病学工具,追溯传染源,确定流行趋势。
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