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第一部分吉非替尼、厄洛替尼与不同化疗药物同步治疗对不同肿瘤细胞株的作用目的本实验旨在探讨吉非替尼、厄洛替尼与多种化疗药物同步治疗对于A549、SPC-A1、LTEP-a-2、H292、A431和PC-9细胞株的影响,以揭示同步给药模式下EGFR-TKIs及化疗药物之间的相互作用。方法采用免疫组化法检测各细胞株EGFR表达,二步PER法检测细胞株第一外显子第12密码子点突变。选用包括多西他赛、培美曲塞、长春瑞滨、吉西他滨、顺铂和阿霉素在内的化疗药物,MTT法检测各同步组(化疗+吉非替尼或化疗+厄洛替尼),并与同浓度单药组的细胞存活率相比较,评价同步给药的效应。选取吉西他滨和厄洛替尼作为代表,计算同步给药的协同指数CI值,判定两药同步给药的相互作用。结果在6种细胞株中多西他塞、培美曲塞、长春瑞滨、吉西他滨、顺铂和阿霉素分别与吉非替尼或厄洛替尼同步作用,同步给药组较各单药组细胞存活率均有下降,但在SPC-A1、A549和LTEP-a-2细胞株中同步组较化疗单药组存活率下降的较少,仅10—20%,且差异大多无统计学意义,而在H292、A431和PC-9细胞株中同步组较化疗单药组存活率下降明显,可达50%甚至更多,差异有统计学意义。在A549、SPC-A1和LTEP-a-2细胞株中,吉西他滨与厄洛替尼同步给药ED50的CI值分别为0.85、1.55、1.02,各实验点CI值的几何均数分别为0.9、1.02、0.98,提示两药联合在这三个细胞株中表现为近似叠加作用;而在H292细胞株中现为中度协同作用,ED50的CI值为0.60,各实验点CI值的几何均数为0.73;在A431和PC-9细胞株中则表现为协同作用,ED50的CI值分别为0.52和0.93,各实验点CI值的几何均数分别为0.44和0.37。结论化疗与EGFR-TKI可以产生协同作用,且这种作用与化疗药物的种类无关,在不同的细胞株中有所不同,与细胞对EGFR-TKI的敏感性有关,也可能和药物敏感性背后潜在的细胞生物学背景存在联系。第二部分厄罗替尼与吉西他宾序贯治疗对A549、SPC-A1、H292和PC-9细胞株的作用目的本实验通过不同顺序序贯给予厄洛替尼和吉西他滨,观察不同的序贯给药模式(厄洛替尼序贯吉西他滨以及吉西他滨序贯厄洛替尼)对于A549、SPC-A1、H292和PC-9细胞增殖能力的影响,以揭示序贯模式下厄洛替尼与吉西他滨在不同细胞株中的相互作用及可能的机制。方法MTT法检测厄洛替尼序贯吉西他滨(E→G)以及吉西他滨序贯厄洛替尼(G→E)的给药模式对对于A549、SPC-A1、H292和PC-9细胞存活率的影响,并通过计算CI值,判定两药序贯给药的相互作用。流式细胞仪检测不同给药顺序对PC-9和A549细胞株细胞周期和凋亡的影响。结果先吉西他滨后厄洛替尼(G→E)的模式在A549、SPC-A1、H292和PC-9细胞株中均表现为协同作用,ED50的CI值分别为0.16、0.66、0.47、0.16,各实验点的CI值几何均数分别为0.28、0.81、0.53、0.19,而先厄洛替尼后吉西他滨(E→G)的模式在PC-9细胞株中表现为明显的拮抗作用,ED50的CI值分别为3.13,各实验点的CI值几何均数分别为2.02,在其余三个细胞株(A549、SPC-A1和H292)中则表现为叠加或轻度协同作用,ED50的CI值分别为1.21、0.96、1.15,各实验点的CI值几何均数分别为0.92、1.12、0.75。细胞周期和凋亡检测结果显示,在PC-9细胞株中,厄洛替尼具有明显的G0/G1期阻滞作用,从而阻碍了后续吉西他滨对S期细胞的作用,而在A549细胞中厄洛替尼没有表现出明显G0/G1期阻滞作用。两种细胞在先吉西他滨后厄洛替尼的给药模式下,均呈现出细胞周期的S期明显增多并且凋亡显著增加。结论厄洛替尼序贯吉西他滨的给药模式可能在部分细胞株中产生拮抗作用,与厄洛替尼引起的G1期细胞周期阻滞有关。吉西他滨序贯厄洛替尼的给药模式在所有实验细胞株中均可表现出协同作用。