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大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis)原产我国,其栽培面积及产量均居我国蔬菜之首。霜霉病是大白菜三大病害之一,严重影响大白菜的产量和品质,因此,抗霜霉病育种一直是大白菜的重要育种目标。随着分子生物学技术的发展,克隆并利用植物的抗性基因,研究这些基因的结构和功能已成为生物技术领域的热点。本研究以大白菜自交系‘85-1’的BAC文库为材料,应用同源序列法筛选抗病同源基因的BAC克隆,对获得的10个阳性克隆进行酶切分析,构建了亚克隆文库,并对筛选的阳性亚克隆进行了测序分析。本试验的研究结果如下:1.根据植物抗霜霉病基因保守区设计简并引物,利用三步PCR方法对大白菜‘85-1’BAC文库进行筛选,从19200个BAC克隆中筛选到含有目的基因的10个阳性克隆。对10个阳性克隆进行NotⅠ酶切,经脉冲场电泳检测,10个克隆的插入片段在80-100kb之间。将10个阳性克隆分别用EcoRⅠ、BamHⅠ及HindⅡ酶切,电泳检测酶切结果,由酶切图谱显示,选择阳性克隆94-G-17和限制性内切酶HindⅡ建立亚克隆文库。2.含抗霜霉病同源基因的亚克隆文库含有6200个克隆,覆盖BAC克隆的180倍左右。随机挑取85个亚克隆进行EcoRI,PstI双酶切,经琼脂糖凝胶电泳检测,其中78个克隆酶切后均有插入片段,其大小基本分布在1-5kb之间,平均插入片段大小为3kp左右。7个克隆酶切后只有载体片段,无插入片段,空载率为8.36%。3.利用上述简并引物,采用三步PCR方法对亚克隆文库进行筛选,获得抗霜霉病同源基因全长,编码区长度为3063bp,含有抗病同源基因具有的TIR结构域、NB-AR结构域和NB-ARC结构域。