【摘 要】
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通过同源性比较原核,古核和真核生物tRNA的核苷酸序列表明tRNA的种 属物异性元件可能存在于氨基酸接受茎,D茎,反密码以及识别位碱基等处.设计完成了tRNA的突变,体外转录及原核、真核两种有同来源的色氨酰tNRA合成酶对tRNA及 其突变体的测活以确定tRNA的种属特异性元件,进一眯揭示tRNA及其合成酶之间的精确识别和共进化过程.原核野生型tRNA其接受茎突变成真核相应的核苷酸后失去了被原核色
【机 构】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所 中国科学
【出 处】
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中国科学院上海生物化学与细胞生物学研究所
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通过同源性比较原核,古核和真核生物tRNA的核苷酸序列表明tRNA的种 属物异性元件可能存在于氨基酸接受茎,D茎,反密码以及识别位碱基等处.设计完成了tRNA的突变,体外转录及原核、真核两种有同来源的色氨酰tNRA合成酶对tRNA及 其突变体的测活以确定tRNA的种属特异性元件,进一眯揭示tRNA及其合成酶之间的精确识别和共进化过程.原核野生型tRNA其接受茎突变成真核相应的核苷酸后失去了被原核色氨酰tRNA合成酶氨酰化的活力,却被赋予了真核合成酶的氨酰化活力.反密码茎,D茎对于氨酰化活力则影响细微.另外,研究者还构建了3种来源于水稻、人和啤酒酵母的线粒体tRNA基因.动力学常数测定表明枯草杆菌TrpRS对线粒体tRNA的亲和 力为野生型tRNA的一半,而催化效率上,水稻和啤酒酵母线粒体tRNA的色氨酰化能力比野生型tRNA则分别下降了400和1200倍,暗示了线粒体tRNA的全局结 构可能与枯草杆菌tRNA很相似,因而揭示了线粒体可能起源于真细菌,但在线粒体TrpRS及其tRNA共进化的过程中发生了一些精细的变化,从而导致枯草杆菌TrpRS氨酰化线粒体tRNA活力的显著下降.研究者高效表达并纯化了枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶(TrpRS) ,通过DEAE-Sepharose CL-6B一步柱层析即可将TrpRS纯化至电泳一条带,因此能够 快捷 ,大量地提供枯草杆菌TrpRS用于tRNA个性元件的研究以及TrpRS的高级结构研究.
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