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目的:静电纺丝纤维支架表面接枝CD40抗体(CD40mAb),一方面通过释放抗体直接诱导肿瘤细胞的凋亡,同时释放抗体诱导树突状细胞(DC)的活化,激发特异性免疫应答,释放细胞因子和活化杀伤性T细胞(CTL),间接实现抑制肿瘤细胞生长的功能;另一方面释放抗体后的支架,为组织再生提供固相载体,诱导新生组织再生。最终实现生物支架的免疫调节抑制肿瘤生长和促进新生组织再生的双重功能。方法:用静电纺丝技术制备左旋聚乳酸(PLLA)静电纺丝纤维支架,经过多巴胺(PDA)的接枝作用将小鼠抗人CD40mAb负载到PLLA支架表面后:(1)比较PLLA,PLLA-PDA,PLLA-PDA-IgG,PLLA-PDA-CD40mAb四组支架的理化性能:使用XPS检测纤维支架的化学组成,使用扫描电子显微镜(SEM)检测纤维支架的形貌特征,使用WCA检测纤维支架的亲水性能,使用力学拉伸测试纤维支架的应变和应力。(2)检测CD40mAb在PLLA-PDA支架的接枝状态,以及吸收和释放效率。(3)比较PLLA,PLLA-PDA,PLLA-PDA-IgG,PLLA-PDA-CD40mAb纤维支架浸出液对肿瘤细胞的杀伤作用:将各组材料浸出液与乳腺癌细胞MDA-MB-231共培养,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞的增殖效率;用实时定量PCR(qRT-PCR)检测MDA-MB-231细胞凋亡相关基因的表达;流式细胞术检测MDA-MB-231细胞早期凋亡比例,使用SEM观察接种在各组静电纺丝支架上的MDA-MB-231细胞的形态,用活死细胞染色法观察MDA-MB-231细胞在各组静电纺丝支架上的生长情况。(4)采用流式细胞术检测各组静电纺丝支架浸出液对树突状细胞(DC)的诱导成熟能力,使用光学显微镜观察DC的形态。(5)比较PLLA-PDA,PLLA-PDA-IgG,PLLA-PDA-CD40mAb浸出液对小鼠成骨前体细胞MC3T3-E1的影响,使用SEM观察接种在各组静电纺丝支架上的细胞的形态,用活死染色法观察细胞在各组静电纺丝支架上的生长情况,使用CCK-8检测MC3T3-E1细胞在材料浸出液中的增殖。结果:(1)PLLA,PLLA-PDA,PLLA-PDA-IgG,PLLA-PDA-CD40mAb之间的形貌基本一致,直径变化不明显,XPS数据显示PDA成功接枝,WCA证明了未接枝PDA之前PLLA纤维支架疏水,接枝PDA后变成亲水,有利于细胞粘附。力学拉伸实验证明接枝PDA前后,不改变纤维支架的力学性能。(2)通过荧光染色技术,验证PLLA-PDA成功的接枝CD40mAb,吸收曲线显示CD40mAb可以在24小时左右完全接枝到纤维支架上,释放曲线表明PLLA-PDA-CD40mAb可以有效的缓慢释放CD40mAb。(3)CCK-8法证明接枝后释放的CD40mAb可以有效的抑制肿瘤细胞的生长,并且随着释放时间的增加,抑制作用越来越大;流式细胞术结果显示,未接枝CD40mAb的纤维支架没有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,而PLLA-PDA-CD40mAb可以诱导细胞凋亡;qRT-PCR数据显示PLLA-PDA-CD40mAb使细胞中Bax mRNA明显上调,Bax/Bcl-2显著增加。SEM显示PLLA-PDA-CD40mAb组细胞明显变圆,细胞状态较差,活死细胞染色中,PLLA-PDA-CD40mAb组红色较多,显示出细胞死亡率高,诱导细胞凋亡的效果最明显。(4)流式细胞术实验表明,与外周血单个核细胞(PBMCs)未诱导组相比,GM-CSF和IL-4组中细胞CD11c,HLA-DR表达率高,表明DC细胞被诱导成熟,CD40mAb组CD11c,HLA-DR表达率高,证明CD40mAb具有诱导DC细胞成熟的能力。同时,与PLLA-PDA,PLLA-PDA-IgG组浸出液相比,PLLA-PDA-CD40mAb组浸出液中细胞HLA-DR表达明显增高,证明PLLA-PDA-CD40mAb组释放的CD40mAb可以诱导细胞成熟。(5)SEM结果显示,各组材料上MC3T3-E1细胞铺展较好,CCK-8显示MC3T3-E1细胞良好生长,活死细胞染色未见明显的红色部分。提示释放完CD40mAb的纤维支架仍然具有促进正常组织再生的潜能。结论:成功制备具有免疫调节抑制肿瘤生长和促进成骨前体细胞增殖的双重功能的生物支架。