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目的初步研究传统化疗药物顺铂对上皮源性卵巢癌细胞SKOV3中组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(Lysine Specific Demethylase 1,LSD1)蛋白表达量的调节及其对肿瘤细胞形态功能学的影响;运用基因分子克隆技术构建LSD1干扰及过表达的卵巢癌稳定转染细胞株,分别从细胞增殖、迁移和凋亡三方面探讨靶向调控LSD1基因表达在卵巢癌细胞对顺铂敏感性中的作用。方法(1)观察在浓度梯度的顺铂处理下卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、凋亡的形态功能学变化,采用Western blot法检测不同浓度顺铂影响下三大功能学相关指标蛋白水平的改变和LSD1及其特异性反应底物组蛋白H3K4甲基化蛋白表达量的变化情况,并筛选出顺铂作用的最佳浓度,用于后续实验研究。(2)扩增、抽提LSD1干扰和过表达质粒,通过琼脂糖凝胶电泳法测定所提各质粒的纯度和验证碱基量的大小。采用Lipofectamine 2000脂质体转染法进行慢病毒包装,获得两种高滴度的LSD1干扰和过表达慢病毒颗粒,分别感染卵巢癌SKOV3细胞,经嘌呤霉素筛选获得沉默LSD1表达的稳定转染细胞株、经嘌呤霉素和遗传霉素G418筛选获得LSD1过表达的稳定转染细胞株,选择多西环素最适工作浓度并诱导卵巢癌细胞中目的基因序列的表达,运用Western blot法鉴定两种SKOV3体外稳转细胞模型是否成功构建。(3)将LSD1干扰和过表达的SKOV3稳转细胞模型作为研究对象,按多西环素(Dox)诱导/不诱导、顺铂(Cisplatin)处理/不处理分为四组,通过MTT实验和Ed U试剂盒检测肿瘤细胞增殖能力的变化、Transwell小室实验观测肿瘤细胞迁移能力的改变、Annexin V/PI双标法细胞染色并经流式细胞仪上机检测细胞凋亡的情况。此外,进一步通过Western blot法从分子水平检测细胞增殖、迁移、凋亡相关蛋白相对表达量的变化情况,从而探究靶向调控LSD1基因表达在卵巢癌细胞对顺铂敏感性中的作用。结果(1)从形态功能学和蛋白表达水平分析,在顺铂作用下卵巢癌细胞增殖、迁移能力明显减弱、细胞凋亡数量显著增加;肿瘤细胞中LSD1相对表达量以顺铂浓度依赖的方式降低,其特异性反应底物H3K4me1、H3K4me2蛋白相对表达量逐渐升高,而H3K4me3无明显变化趋势。(2)实验所构建的慢病毒介导干扰LSD1的卵巢癌稳转细胞株在经多西环素诱导后LSD1相对表达水平降低,而过表达的SKOV3细胞株经诱导后可见LSD1的相对表达水平升高,表明成功干预LSD1基因在卵巢癌细胞SKOV3中的表达。(3)慢病毒沉默LSD1表达的卵巢癌SKOV3细胞株中,干扰LSD1的表达可以抑制细胞增殖、迁移,并促进细胞凋亡;而LSD1过表达细胞株则与之相反,可以促进细胞生长、迁移,抑制细胞的程序性死亡。此外,沉默LSD1的表达可以促进顺铂所诱导的细胞凋亡,增加顺铂对肿瘤细胞的增殖和迁移抑制率;而LSD1的过表达则增加了卵巢癌细胞对顺铂的抵抗作用。结论本研究证实顺铂能够调节SKOV3细胞中LSD1及其甲基化底物H3K4me1、H3K4me2的表达,抑制细胞增殖、迁移能力,并促进细胞凋亡;成功构建靶向干扰和过表达LSD1的两种卵巢癌SKOV3体外稳定转染细胞模型,分别能有效沉默和过表达肿瘤细胞中的靶基因LSD1;靶向干扰LSD1的表达能协同增加顺铂抑制细胞增殖、迁移以及诱导细胞凋亡的能力,能增加卵巢癌细胞对顺铂的敏感性,增强顺铂对肿瘤细胞的杀伤力;而LSD1过表达能拮抗顺铂促进细胞凋亡的能力,降低顺铂对癌细胞生长和迁移的抑制率,增加卵巢癌细胞对顺铂的耐受和抵抗。以上的实验研究发现为LSD1的原癌基因性质提供了新的依据。