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食管肿瘤干细胞是食管癌组织中一小部分具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能的细胞，它在食管癌组织中所占比例虽然很少，却与食管癌发生、发展与转移密切相关。p75NTR是一种低亲和性神经营养素受体(neurotrophinreceptor p75，p75NTR)，属Ⅰ型跨膜TNF受体超家族成员。在以往的研究中，p75NTR曾被用来分离神经冠干细胞，鼠脂肪多能干细胞和人角膜上皮原始祖细胞等。Okumura等研究证明正常食道上皮细胞中的p75NTR+细胞具有增殖、自我更新及多向分化能力，经鉴定为食道上皮干细胞。本实验将采用流式细胞分选技术对食管鳞癌细胞以p75NTR为标志进行分选，而后将p75NTR+和p75NTR—食管鳞癌细胞进行生物学特性研究和基因表达谱差异筛选，并以筛选出的某一差异基因为目的基因，通过干扰其表达后研究p75NTR+食管鳞癌细胞增殖及侵袭情况。第一部分p75NTR阳性食管鳞癌细胞生物学特性研究目的：分选获取p75NTR+食管鳞癌细胞，通过一系列实验探讨其是否具有TSC的特性。方法：以流式细胞仪分选获取相应p75NTR+和p75NTR—食管鳞癌细胞，而后分别进行细胞单克隆形成能力、增殖分化能力、侵袭能力、耐药能力、成瘤能力的对比研究试验，来探讨p75NTR+人食管鳞癌细胞的TSC的特性。结果：成功分选出p75NTR+和p75NTR—食管鳞癌细胞； p75NTR+细胞的单克隆形成能力、自我更新能力、侵袭能力强于p75NTR—细胞；在对化疗药物的耐受能力及小鼠致瘤能力上，p75NTR+细胞明显强于p75NTR—细胞。结论：p75NTR+食管鳞癌细胞比p75NTR—细胞具有更强的侵袭性、致瘤能力及耐化疗能力，可能富集食管磷癌干细胞。第二部分p75NTR阳性和p75NTR阴性食管鳞癌细胞差异表达功能基因筛选目的：对比p75NTR+和p75NTR—食管鳞癌细胞基因表达谱差异，探寻并筛选p75NTR+食道鳞癌细胞中干细胞特性相关基因的表达，为从肿瘤干细胞角度研究食管肿瘤的发病机理和寻找新的治疗靶点提供线索。方法：采用全基因组表达谱芯片对p75NTR+和p75NTR—细胞进行基因表达谱差异分析及筛选，并对筛选出的显著差异表达基因，应用RT-PCR方法比较部分基因丰度。结果：在食管鳞癌细胞中p75NTR+细胞较p75NTR—细胞，Bmi-1和EZH2显著高表达（P＜0.01）；根据生物学功能分类结果，初步筛选出和干细胞特性密切相关的与TGF-β和Wnt信号途径相关的上调基因共12条。结论：p75NTR+与p75NTR—细胞比较，p75NTR+食管鳞癌细胞高表达与干细胞特性相关基因（Bmi-1、EZH2），进一步证实了p75NTR+食管鳞癌细胞具有肿瘤干细胞特性。并为寻找食管鳞癌干细胞靶向治疗提供线索。第三部分RNA干扰沉默EZH2基因对P75NTR阳性食管鳞癌细胞增殖及侵袭的影响目的：以第二部分筛选的差异基因EZH2为目的基因，通过干扰沉默目的基因后，对p75NTR+食管鳞癌细胞增殖及侵袭有何影响。方法：以EZH2基因为靶点，设计构建其干扰小RNA的表达载体并转染p75NTR+食管鳞癌细胞，之后通过一系列实验，评价RNA干扰沉默EZH2基因后对p75NTR+食管鳞癌细胞增殖及侵袭的影响结果：p75NTR+食管鳞癌细胞中成功转染了干扰EZH2基因表达小RNA载体，细胞转染后，实验组细胞倍增时间较对照组明显延长（P＜0.01）；细胞成克隆实验、细胞凋亡实验中实验组与对照组两者差异有统计学意义； Transwell小室侵袭实验显示实验组细胞侵袭率明显低于对照组。结论：RNA干扰抑制EZH2基因表达能显著降低p75NTR+食管鳞癌干细胞的增殖和侵袭能力，提示EZH2基因有望成为食管鳞癌干细胞基因治疗的潜在靶点。