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叉头框(Forkhead box:Fox)转录因子家族通过结合DNA,激活或抑制目的基因的转录活性,在生物体发育及其成熟的组织器官中均发挥重要作用。该家族是一个功能广泛而且庞大的家族,目前,已被分为19个亚族(A~S)。2003年,Francoise等鉴定了黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)和冈比亚按蚊(Anopheles gambiae)的Fox转录因子家族,为进一步研究昆虫纲内该家族各基因的功能奠定了基础。 FoxO是Fox转录因子家族中非常重要的一个亚家族,其转录活性受保守的磷脂酰肌醇3-激酶(Phosphatidylinositol-3 kinase,PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)磷酸化级联通路的调节。FoxO在生物的生长发育、代谢、衰老和免疫中发挥重要的调节作用。在秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)中,FoxO的同源物daf-16可以调节细胞周期停滞、寿命延长,形成dauer表型;在黑腹果蝇中,FoxO的激活也调控卵巢发育停滞。对家蚕(Bombyx mori)FoxO基因研究发现,该基因可以在化蛹期间上调脂类分解基因来满足能源需求。在研究尖音库蚊(Culex pipiens)滞育调控分子机理中证实,FoxO基因可以通过调控下游抗氧化相关基因的表达进而保护其在滞育期间免受氧化的破坏。 滞育(Diapause)是昆虫在特定时期发育停滞的现象,其主要特征表现为新陈代谢降低、抗性增强和寿命延长等。葱蝇是双翅目(Diptera)、花蝇科(Anthomyiidae)、地种蝇属(Delia)昆虫,同时具有冬滞育和夏滞育,且出现在头外翻之后同一发育时间点,是研究滞育的理想物种。但是葱蝇FoxO基因与葱蝇滞育的关系还不清楚。 本研究基于葱蝇的转录组,鉴定了葱蝇Fox转录因子家族全部序列;并在此基础之上克隆了该家族中重要FoxO基因的全长cDAN序列,命名为DaFoxO,并对该基因进行了生物信息学分析;同时通过实时荧光定量PCR技术分析了DaFoxO基因在葱蝇滞育和非滞育不同时期的表达情况。研究结果如下: ①通过保守结构域FH的系统发生分析,鉴定出葱蝇的转录组中共有Fox家族中的5个亚家族,分别为A、G、K、O和N亚家族。 ②克隆了葱蝇FoxO的cDNA全长序列,其全长序为2081 bp,开放阅读框为1857 bp,编码619个a.a.,预测该基因编码蛋白的分子质量为68.5 kDa、等电点为5.42。对葱蝇FoxO基因编码氨基酸功能位点的预测分析发现:该蛋白有一个保守功能域,位于89~178位a.a.的FH结构域。 ③通过实时荧光定量PCR技术分析葱蝇FoxO基因在滞育和非滞育不同时间点的相对表达含量,其结果表明:在非滞育、夏滞育和冬滞育的头外翻期FoxO基因均出现抬高表达;在非滞育头外翻之后开始下调且呈现相对稳定的状态;夏滞育和冬滞育头外翻后下调表达,且在滞育维持期保持相对低的表达水平,在滞育期后期其表达水平又再次上调。这些结果表明葱蝇FoxO基因可能在葱蝇头外翻期以及滞育结束后的发育过程起着重要的作用。