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背景:结直肠癌（CRC）是最常见也是致死率最高的恶性肿瘤之一。随着生活方式的改变,CRC的发病率逐渐上升,不仅给社会和家庭带来沉重的经济负担,更成为了严重危害人类健康的公共问题。目前对结直肠癌的治疗手段包括手术、放疗、化疗、靶向治疗和联合治疗。虽然随着这些治疗手段的长足进步,CRC患者的5年生存率明显提高,但晚期CRC的预后仍然极差。因此,阐明CRC发生、发展过程中的精确分子调控机制至关重要,对于开发新的CRC诊断、预防和治疗策略有着重要的意义。环指蛋白187（RNF187）属于含有环结构域的E3连接酶家族,最近有报道称其参与了多种恶性肿瘤的发生、发展。然而,RNF187在CRC发病以及进展中的作用仍不清楚。目的:研究RNF187在CRC组织中的表达、调控机制以及对CRC细胞生物学行为的作用。方法:通过qRT-PCR分析了CRC标本（n=83）以及配对的相邻结肠组织中RNF187 m RNA和miR-144-5p的表达水平。通过western blot检测CRC标本和正常结肠组织中RNF187的蛋白质水平。通过免疫组化染色分析RNF187在细胞中的分布,以及在CRC肿瘤组织和正常结肠组织中的表达。通过qRT-PCR和western blot检测人结肠上皮细胞NCM460细胞和CRC细胞系（CaCO2、SW480、H29和HCT-116）中的RNF187 m RNA表达和蛋白质水平。分别用RNF187 si RNA或阴性对照si RNA转染CaCO2和SW480细胞,转染终浓度为100 n M,转染时间为24小时。转染后,分别在24小时、48小时和72小时时间点通过CCK8测定检测细胞增殖能力。CaCO2和SW480细胞用RNF187 si RNA或阴性对照si RNA转染48小时,然后进行细胞克隆形成实验,细胞接种十天后,对单克隆形成数目进行定量分析。建立CRC异种移植小鼠模型,将CaCO2细胞（2×10~6）和Matrigel的混合物皮下注射到小鼠左侧臀部。注射后7天,每3天对小鼠进行瘤内注射RNF187 si RNA（每只小鼠1 nmol）或等量的阴性对照si RNA,共21天（7次）,且从第8天始,每4天测量肿瘤体积。接种后28天,处死小鼠并剥离异种移植肿瘤进行重量测量。CaCO2和SW480细胞用RNF187 si RNA或阴性对照si RNA转染24小时,通过细胞划痕实验检测CRC细胞迁移能力,通过Transwell实验评估CRC细胞迁移能力,细胞侵袭能力由Transwell Matrigel侵袭试验测定。将pmir GLO载体（空载体）、pmir GLO-RNF187-3’UTR-wt或pmir GLO-RNF187-3’UTR-mut分别与miR-144-5p或阴性对照miRNA共转染到HEK-293T细胞中,转染24小时后,收集细胞检测荧光素酶活性。用miR-144-5p或阴性对照miRNA转染CaCO2和SW480细胞,48小时后,通过western blot和qPCR检测细胞中RNF187蛋白和m RNA水平。转染miR-144-5p或阴性对照miRNA后,通过CCK8、成克隆实验、划痕实验、Transwell实验和裸鼠荷瘤实验测定检测CRC细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力。我们用表达RNF187的慢病毒或空载体病毒颗粒感染CaCO2细胞,转染miR-144-5p后,通过CCK8、成克隆实验、划痕实验、Transwell实验和裸鼠荷瘤实验测定检测CRC细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力。结果:RNF187广泛分布在CRC细胞核和细胞质中,CRC组织中的RNF187蛋白水平和m RNA表达明显高于正常组织。与正常结肠粘膜细胞系细胞相比,CRC细胞系中RNF187的m RNA表达以及蛋白质水平显著增加。通过分析TCGA数据库数据的结果显示,与RNF187表达较低的患者相比,RNF187表达较高的CRC患者总生存期较短。在CaCO2和SW480细胞中,RNF187的敲低以时间依赖性方式显著降低CRC细胞的活力和体外成克隆的能力。RNF187 si RNA处理可减轻荷瘤小鼠的肿瘤重量和肿瘤的体积。细胞划痕测试结果表明,与转染阴性对照si RNA的CRC细胞相比,转染RNF187 si RNA的CaCO2或SW480细胞的划痕修复率明显降低。同时,通过transwell实验发现,转染RNF187 si RNA显著减少了迁移和侵入的CaCO2或SW480细胞的数量。通过生物信息学分析发现,RNF187是miR-144-5p的直接靶标。在转染RNF187-3’UTR-野生型（wt）而非RNF187-3’UTR-突变体（mut）的HEK-293T细胞中,miR-144-5p转染可导致荧光素酶活性明显降低。此外,miR-144-5p转染降低了CaCO2和SW480细胞中的RNF187蛋白和m RNA水平。并且,miR-144-5p在CRC组织中的表达下调,与RNF187的表达呈负相关。miR-144-5p的过表达显著抑制了CRC细胞在体内和体外的增殖和转移。细胞划痕测试结果表明,与转染阴性对照miRNA的细胞相比,转染miR-144-5p的CaCO2或SW480细胞的划痕修复率较低。同时,通过transwell测定显示,miR-144-5p显著减少了迁移和侵入CaCO2或SW480细胞的数量。我们用表达RNF187的慢病毒或空载体病毒颗粒感染CaCO2细胞,表达RNF187慢病毒感染的细胞中,RNF187的表达远高于感染空载体病毒颗粒的细胞。在体外实验中,同样转染miR-144-5p的情况下,RNF187过表达的CaCO2细胞增殖和克隆能力明显高于感染空载体病毒颗粒的细胞。此外,RNF187的过表达显著阻断了miR-144-5p对CaCO2细胞异种移植肿瘤重量和体积的抑制。进一步的研究表明,同样转染miR-144-5p的情况下,RNF187过表达的CaCO2细胞迁移和侵袭能力明显高于感染空载体病毒颗粒的细胞。结论:综上,miR-144-5p直接靶向抑制RNF-187在结肠癌中的表达,在结直肠癌中miR-144-5p表达下降而RNF-187表达上升,显著促进肿瘤细胞的生长和转移能力,并提示患者预后不良。