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高速逆流色谱(High-SpeedCounter-CurrentChromatography，HSCCC)是利用螺旋管方向性与高速行星式运动相结合产生的一种独特的流体动力学现象，使样品中的各组分在相对移动的互不相溶的两相(一相为固定相，另一相由恒流泵连续输入，为流动相)中实现高效的接触、混合、分配和传递，并按照分配系数的不同依次沈脱而获得分离的一种完全的液液色谱[1]。它消除了由于使用载体而带来的样品吸附、污染、峰形变形等现象，并且已渐渐从最初的进样量为几十毫克的分析型发展到一次最多进样可达几十克粗品的较大容量的制备型，特别适合天然药物中活性成分的制备分离[2]。鉴于这些优点，HSCCC在制备标准品、研究天然药物化学成分以及新药开发等领域得到越来越广泛的应用。
中国加入WTO后，天然药物现代化发展显示出更广阔的发展前景，对天然药物的分离技术也提出更高的要求。HSCCC可以从复杂的天然粗制品中分离提取不同特性的有效成分，为天然药物的发展提供了有利的条件。现在，应用高速逆流色谱法分离提取天然药物中黄酮、生物碱、香豆素、蒽醌类衍生物、皂甙等有效成分方面已获得满意结果[3]。
本文对HSCCC在中草药活性成分的制备性分离纯化方面的应用进行了研究，建立了HSCCC对蛇床子中香豆素、白花前胡中香豆素、厚朴中和厚朴酚与厚朴酚以及防风中升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷制备性分离纯化的方法，并利用紫外光谱、核磁共振、高效液相色谱等对目标产物的纯度和化学结构进行了分析和鉴定。
1.HSCCC分离纯化中药蛇床子中的香豆素建立了HSCCC一次性分离、纯化中药蛇床子中多种香豆素类成分的新方法。应用HSCCC从200mg样品提取物中分离纯化出六种高纯度化合物，其质量和鉴定结果如下：花椒毒素(7.6mg)，异虎耳草素(7.6mg)，佛手柑内酯(9.7mg)，欧前胡素(60.5mg)，蛇床子素(50.6mg)，未知化合物(10.2mg)。除花椒毒素的纯度为95.0％以外，其它四种均在99.0％以上。
HSCCC色谱条件如下：溶剂体系：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，固定相：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，V/V)的上相，流动相：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，S：5：6：4，5：5：6.5：3.5，V/V)的下相梯度洗脱，洗脱梯度为：0～100min，石油醚-乙酸1乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，V/V)的下相，100～250min，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：6：4，V/V)的下相，250min以后，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：6.5：3.5,V/V)的下相。分离温度：35℃，流速：2.0ml/min，转速：900rpm，固定相保留率：约60％，检测波长：254nm。
分配系数和纯度的测定采用HPLC。色谱条件为：SPHERIGELODSC18柱(250mm×4.6mm.I.D.，5μm)，柱温：25℃，流动相：甲醇：乙腈：水梯度洗脱，洗脱梯度：0～30min，甲醇-乙腈-水30：30：40→50：30：20；流速：1.0ml/min，检测波长为254nm。
制得的各组分的结构鉴定采用紫外光谱和核磁共振技术，紫外光谱图和核磁数据见文2。2.HSCCC分离纯化中药白花前胡中的香豆素建立了HSCCC一次性分离纯化中药白花前胡中多种香豆素的新方法。应用HSCCC从110mg中药白花前胡提取物中分离纯化出五种化合物，其质量与鉴定结果为：前胡香豆素D(5.3mg)，Pd-Ib(7.7mg)，白花前胡丙素(35.8mg)，白花前胡乙素(31.9mg)，未知化合物(6.4mg)。除Pd-Id的纯度为92.8％外，其余组分的纯度均在98.6％以上。
HSCCC色谱条件如下：溶剂体系：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水；固定相：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，V/V)的上相；流动相：石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，5：5：6.5：3.5，V/V)的下相梯度洗脱，洗脱梯度为：0～150min，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，V/V)的下相，150～300min，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：5：5，V/V)的下相由100％变到0，300min后，石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(5：5：6.5：3.5，V/V)下相；分离温度：35℃；流速：2.0ml/min；检测波长：254nm；转速：900rpm；固定相保留率：55％。
分配系数及纯度的测定采用HPLC。色谱条件：SPHERIGELODSC18柱(250mm×4.6mm.I.D.，5μm)；柱温：25℃；流动相：甲醇-水梯度洗脱，洗脱梯度为：0～30min，甲醇-水75：25→80：20，30～40min，80：20→90：10，流速：0.5ml/min；检测波长：254nm。
制得的各组分的结构鉴定采用紫外光谱和核磁共振技术，紫外光谱图和核磁数据见文3。3.HSCCC分离纯化中药厚朴中的和厚朴酚与厚朴酚2建立了HSCCC一次性分离纯化中药厚朴中有效成分和厚朴酚与厚朴酚的新方法。和厚朴酚与厚朴酚是一对同分异构体，常规的纯化制备方法烦琐费时，应用HSCCC一次使可同时制备一定量的和厚朴酚与厚朴酚。应用HSCCC从100mg提取物中一次性得到33.3mg和厚朴酚和19.5mg厚朴酚，其纯度分别为99.6％和99.9％。
HSCCC条件如下：溶剂体系：石油醚—乙酸乙酯—甲醇—1％乙酸(5：5：7：3，V/V)，固定相：其上相，流动相：其下相，流速：2.0ml/min，分离温度：20℃，转速：900rpm，固定相保留率：60％，检测波长：254nm。分配系数及纯度测定采用HPLC。色谱条件如下：色谱柱：SPHERIGELODSC18(250mm×4.6mm.ID.5μm)；流动相：甲醇-1％乙酸梯度洗脱(0～20min，甲醇：1％乙酸：30：70→75：25)；流速：1.0ml/min；温度：25℃；检测波长：254nm。
制备得到的各组分鉴定采用紫外光谱和核磁共振技术。紫外光谱图和核磁数据见文4。4.HSCCC分离纯化中药防风中的升麻苷和5-0-甲基维斯阿米醇苷建立了HSCCC一次性分离纯化中药防风中活性成分升麻苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的新方法。应用HSCCC从150mg防风正丁醇萃取物一次性分离制得44.7mg升麻苷和21.7mg的5-0-甲基维斯阿米醇苷，其纯度都在99.0％以上。
HSCCC的色谱条件如下：溶剂体系：氯仿-甲醇-水(7：6：3，V/V)，固定相：其上相，流动相：其下相，流速：2.0ml/min，分离温度：20℃，检测波长：254nm，转速：900rpm，固定相保留率：55％。
分配系数及纯度测定采用HPLC。色谱条件如下：色谱柱：SPHERIGELODSC18(250mm×4.6mm.ID.5μm)；流动相：甲醇-水梯度洗脱，0～20min，甲醇-水10：90→30：70，20～40min，30：70→50：50；流速：0.70ml/min，温度：25℃；检测波长：254nm。
制备得到的各组分鉴定采用紫外光谱和核磁共振技术。紫外光谱图和核磁数据见文5。