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本研究构建了骨骼肌特异性启动子pCKM与突变型甲状旁腺激素原基因的重组基因表达体系pCKM-mPTH质粒,在体外转染骨骼肌细胞;体内转染甲旁低动物模型骨骼肌,观察PTH的转录水平及血清浓度变化,探讨pCKM-mPTH质粒对甲旁低的治疗作用,旨在采用基因工程技术为治疗甲旁低提供不受共体来源限制,避免使用免疫抑制剂的新方法,为研究甲旁低的基因治疗奠定基础。
本研究结果表明,利用重叠PCR技术可以很方便地自基因组DNA中获得甲状旁腺激素原的cDNA,而PCR的定点突变技术可以同时将Fruin识别和切割位点引入ProPTH的N-端;成功构建了SD大鼠重组基因表达体系pCKM-mPTH质粒;改造后的甲状旁腺激素原能被furin酶裂解成为有活性的甲状旁腺激素,以及有活性的甲状旁腺激素能够排泌到细胞外;应用pCKM-mPTH质粒治疗SD大鼠的甲状旁腺功能低下症是有效的。