LncRNA-Ptma的鉴定及表达谱的分析

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伴随生物技术(高通量测序技术)的不断发展与完善,越来越多的LncRNAs浮现在人们眼前,但是到目前为止人们探索得到其功能的LncRNAs少之又少,现阶段LncRNA的研究还处于初级阶段。本研究利用RNA-seq数据结合生物信息学技术筛选得到一个新非编码RNA基因,该基因位于小鼠一号染色体上,并且预测得到它的靶基因为其上游的Ptma基因,所以我们将该基因命名为LncRNA-Ptma基因。首先通过3’RACE实验方法获取一条长度为500 bp的条带,测序结果显示该序列具有明显的polyA尾序列和AATAA终止序列,同样应用5’RACE实验方法获取一条长度为423 bp的条带,测序结果显示该序列具有明显的转录起始位点峰值,于是将该基因的3’RACE和5’RACE实验结果拼接,我们获得了一条长度为652 bp的转录本,同时又应用Northern的实验方法验证了该转录本的数目与大小。接下来通过ORF、CSF等生物信息学方法以及细胞定位的实验方法对LncRNA-Ptma基因的非编码性进行验证,ORF小于200 nt、CSF数值为负数以及细胞的核定位的结果共同显示该基是一条长非编码RNA。其次获取该基因的表达谱信息,首先通过原位杂交技术对LncRNA-Ptma基因在小鼠E9.5天、E12.5天、E15.5天胚胎中的组织分布进行检测。原位杂交结果显示该基因在小鼠胚胎各个组织中均有表达,脑组织中表达含量最高。接下来对LncRNA-Ptma基因在E15.5时期的不同组织中的表达丰度进行检测,结果显示该基因在小鼠各组织脏器中均有表达,但是在脑组织中表达含量最高,其次是肝脏、肺脏组织,在舌、心脏中也有一定的表达量。这与原位杂交的结果相一致。最后定量RT-PCR结果显示LncRNA-Ptma基因在小鼠胚胎发育不同时期的不同组织(以脑组织、肝脏组织、肺脏组织为例检测)中均存在动态表达模式。并且变化趋势显示该基因在E15.5天表达量最高,这预示着该基因可能参与到小鼠胚胎发育的中后期器官的发育过程中。综上所述,本研究得到了一条与小鼠胚胎发育相关的新的LncRNA-Ptma基因,并且成功获取该基因的全长以及其转录本信息,并且验证了它的非编码性。通过定量PCR技术以及原位杂交技术获得了该基因在小鼠不同时期不同组织中的表达丰度与组织分布情况,这些结果预示着该基因可能对小鼠胚胎不同组织脏器的发育中扮演一定的角色,这也为后续的敲除小鼠模型的建立提供了基础的保障作用。
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