论文部分内容阅读
背景与目的: 食管癌是最常见的消化道恶性肿瘤之一,其中食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)与食管腺癌(Esophageal adenocarcinoma,EA)是食管癌最常见的两种组织学类型。在已发现的食管癌中存在明显的性别差异,相同生存环境中男性发病率要远远高于女性患者,男女患病比例为3-9:1,且男性患者、绝经后女性患者死亡率高于绝经前女性患者。以往研究结果也显示食管癌组织中雌激素受体(estrogen receptor,ER)和雄激素受体(androgen receptor,AR)含量与患者性别、肿瘤分化程度、浸润程度、有无淋巴结转移有关。而带有性激素受体的食管癌细胞生长受循环中性激素水平的影响。 为进一步探究性激素与性激素受体在食管癌发病中的作用与影响,本研究采用雄激素类似物以及雄激素受体抑制剂处理食管癌细胞系,然后检测ERβ表达的变化以及细胞增殖等生物学性状的改变,并通过染色质免疫共沉淀分析探讨其作用机制。 材料与方法: 1.Western-blot检测食管癌细胞系EC109、EC9706、TE3、Kyse510中AR表达情况。 2.雄激素类似物米勃龙(Mibolerone,MIB)分别处理食管癌细胞EC109、EC9706细胞24h、48h,qRT-PCR、Western blot检测MIB作用后ERβ在RNA水平和蛋白水平的表达变化。 3.MIB以及雄激素受体抑制剂羟基氟他氨(Hydroxy flutamide,OH-FI)分别处理食管癌细胞EC109、EC9706细胞48h。qRT-PCR、Western blot检测药物作用后EC109、EC9706中ERβ在RNA水平和蛋白水平的表达变化。 4.染色质免疫共沉淀(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)检测食管癌细胞系EC9706中AR与ERβ启动子是否相互结合。 5.通过细胞计数、细胞增殖实验检测MIB对食管癌细胞增殖的影响。 结果: 1.Western blot结果显示食管癌细胞系EC109与EC9706中有雄激素受体的表达,而食管癌细胞系Kyse510与TE3未检测到雄激素受体,因而我们在后续的研究中选择食管癌细胞系EC109与EC9706作为实验对象。 2.MIB作用48小时使食管癌细胞ERβ在mRNA、蛋白水平表达上调,而雄激素受体抑制剂羟基氟他氨可以逆转由MIB对ERβ表达的调节作用。 3.ChIP结果显示在雄激素存在时,AR结合在ERβ启动子区域。 4.细胞增殖实验结果示EC9706、EC109用10nM MIB处理48h之后,在各个时间点检测EC9706、EC109较对照组增殖活跃。 结论: 1.AR在食管癌细胞系EC109与EC9706中表达,而在Kyse510与TE3无表达。 2.雄激素类似物以及雄激素受体抑制剂药物实验结果提示食管癌细胞系EC109、EC9706中雄激素可能通过AR介导增加ERβ表达,并导致细胞增殖活跃。 3.染色质免疫沉淀结果显示雄激素受体结合在ERβ启动子DNA上,提示雄激素和雄激素受体在转录起始水平调控ERβ的表达,并可能与食管癌细胞的增殖等生物学行为相关。