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钩藤碱（Rhynchophylline）是一种从绒毛钩藤Uncaria tomentosa（Wild.）DC.提取的羟吲哚生物碱,是绒毛钩藤提取物中的主要生物碱。前期研究表明钩藤碱具有显著的抑制炎症作用。在体肠吸收研究发现,钩藤碱的口服生物利用度不高。对于口服药来讲,影响药物生物利用度至关重要的因素是其通过消化道的转运吸收与药物转运原理,由于钩藤碱的生物利用度较低,所以本篇论文以此构建模型药物,构建钩藤碱吸收次序的试验方法,探究它在机体内吸收的模式。在机体外模仿人类小肠上皮细胞的模型里,Caco-2细胞模型被广泛应用,它表达的转运蛋白水平、P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）及水解酶和人类机体的肠上皮细胞表达水平相似,所以经常被应用于试验药物在人机体肠上皮细胞中的吸收与转运原理的实验中。因而,本文实验目的在于观察钩藤碱于Caco-2细胞模型里吸收与转运的规律,为今后有关钩藤碱的研究贡献可靠的实验数据与理论基础。目的构建并验证Caco-2细胞模型,观察钩藤碱于Caco-2细胞模型中吸收与转运的规律。方法1.经观测Caco-2细胞形态学的变化,测定Caco-2细胞单层TEER值和肠刷状缘细胞标志酶—碱性磷酸酶的活性,建立并验证Caco-2细胞模型。2.建立高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography,HPLC）检测钩藤碱在Caco-2细胞模型里含量的手段,用来测定受试药物于基底面（Basolateral,BL）及肠腔面（Apical,AP）的浓度,推算这些指标的表观渗透系数（Apparent drug permeability coefficient,Papp）与表观渗透比（Apparent permeability ratio,PDR）。3.观察钩藤碱不同浓度（31.25、62.5和125μM）和不同时间（0、30、60、90、120 min）在Caco-2细胞模型上的吸收情况。4.考察P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）抑制剂维拉帕米对钩藤碱在Caco-2细胞模型中对吸收所造成的影响。结果1.于光学倒置显微镜下观测到细胞之间能够形成良好的紧密连接,细胞生长均匀,轮廓清晰,第21天,TEER值升至984.45±55.15Ω*cm2,转运实验前后电阻基本恒定,表明其具有足够的完整性,第21天,AP/BL的比值为5.10±0.07,说明随着培养细胞时间的增加,细胞AP侧的碱性磷酸酶活力和BL侧碱性磷酸酶活力之比显著升高,AP侧是碱性磷酸酶主要聚集的地方,同时发生了极化现象,成功建立Caco-2细胞模型。2.成功建立了准确可靠的HPLC检测方法用于Caco-2细胞模型HBSS液中的钩藤碱的检测,出峰时间达到了8.06分钟,无显著的Caco-2模型内溶液干扰。3.钩藤碱在31.25、62.5和125μM浓度范围内,钩藤碱的Papp(10-6cm/s)B-A组和Papp(10-6cm/s)A-B值具有浓度依赖性,且Papp(10-6cm/s)B-A与Papp(10-6cm/s)A-B之间比值PDR值>1.5。4.钩藤碱在0～120 min时间内,双向转运量随着时间的增加而增加,于60 min时间点吸收显著增强,且Papp B-A均显著高于Papp A-B,表明钩藤碱在吸收过程中具有时间依赖性,且外排量大于吸收量。5.P-gp蛋白抑制剂维拉帕米可使钩藤碱Papp（AP→BL）值增加约对照组（不加抑制剂）1.63倍（20.76±2.27）×10-6cm/s vs 12.74±0.54×10-6cm/s,P<0.05)。P-gp蛋白抑制剂维拉帕米可显著降低钩藤碱自BL面至AP面的表观渗透系数（Papp值）,明显增加自AP面至BL面的表观渗透系数（Papp值）。加入P-gp抑制剂维拉帕米后,钩藤碱的转运速率在AP→BL方向由（51.56±1.36）×10-5nmol/s增加到（60.37±5.31）×10-5nmol/s,在BL→AP方向的转运速率由（86.46±6.15）×10-5nmol/s降低到（72.74±4.08）×10-5nmol/s。结论1.培养的Caco-2细胞生长均匀、轮廓清晰、紧密连接良好,Caco-2细胞单层模型建立成功,可用于药物转运试验。2.成功建立了钩藤碱的高效液相色谱法（High-performance liquid chromatography,HPLC）检测方法,用于其在Caco-2细胞模型里的含量测定。3.钩藤碱对Caco-2细胞中P-糖蛋白表达具有诱导作用,双侧转运的转运量都随着时间和药物浓度的增加而明显增加。钩藤碱在Caco-2细胞模型中的转运存在明显的外排现象,揭示了其中等渗透性。4.钩藤碱被部分吸收,透过Caco-2细胞模型的吸收方式以主动转运为主且有外排蛋白P-gp的参与,可能还存在其他外排蛋白的参与。5.钩藤碱是P-gp底物。