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本研究的主要内容是分析烟草NtabSPL6-1和NtabSPL6-4两个基因的功能,以及筛选NtabSPL6-1的互作蛋白。首先,通过农杆菌介导的遗传转化技术获得了组成性表达NtabSPL6-1和NtabSPL6-4基因的转基因拟南芥和烟草,并对NtabSPL6-1转基因植株的表型特征进行了观察和分析。在此基础上,通过免疫共沉淀与质谱联用技术(CoIP-MS)初步鉴定了可能与NtabSPL6-1存在相互作用的蛋白质,并做了生物信息学分析。在进行遗传转化实验之前,利用设计的特异性引物扩增了NtabSPL6-1和NtabSPL6-4两个基因的编码序列,构建了过表达载体和GFP亚细胞定位载体。进一步将重组质粒转化至农杆菌GV3101和LBA4404菌株,采用浸花法和叶圆盘法分别对Col-0野生型拟南芥植株和秦烟95叶片进行了转化,得到了转基因植株。表型观察发现,NtabSPL6-1基因在拟南芥中的组成性表达能够促进叶片表皮毛的发育,影响叶片的生长模式。在烟草中,NtabSPL6-1基因的过量表达能够引起植株矮化,改变叶片的形态结构,影响叶片腺毛的生长发育过程。根据已有的研究结果,推测NtabSPL6-1基因可能通过调节生长过程来间接影响植物对胁迫因素的抗性。本工作制备了 NtabSPL6-1的多克隆抗体,利用CoIP-MS技术对NtabSPL6-1的相互作用蛋白进行了初步筛选,并从Biological Process(BP)、Cell Component(CC)和Molecular Function(MF)三个层面对这些蛋白质进行了生物信息学归类与注释。结果显示,这些蛋白质主要参与的生物学过程是细胞过程、细胞代谢过程和细胞大分子代谢过程,基本上都定位于细胞内。重要的是,其中一些蛋白质参与了植物-病原体互作途径、植物激素信号转导途径以及芥子油苷生物合成途径,结合已有的研究报道以及本工作对转基因植物的表型观察结果,推测这些蛋白质可能与NtabSPL6-1具有相互作用。同时,本研究还建立了烟草叶片酵母双杂交cDNA文库,构建了 NtabSPL6-1诱饵载体并对自激活能力进行了检测,确定了可以用于酵母双杂交实验的诱饵肽段,为进一步筛选互作蛋白打下了基础。在实验过程中,构建的诱饵载体分别携带NtabSPL6-1的完整编码序列、SBP-C端编码序列、C端编码序列、N端编码序列和N端三个不同部位的编码序列。研究结果显示,NtabSPL6-1的SBP-C端和C端具有很强的转录激活能力,完整蛋白、N端和N1肽段具有较弱的转录激活能力,N2和N3肽段没有转录激活能力。由于完整的NtabSPL6-1蛋白只具有较弱的转录激活能力,而SBP-C端和C端具有很强的转录激活能力,所以NtabSPL6-1蛋白具有自我调节能力,它的N端可以封闭C端的活性。烟草NtabSPL6-1基因可能参与了植物激素信号转导途径,能够影响植物表皮毛的发育过程,它可能在烟草抵御虫害方面起着重要的作用。烟草中应该存在一些与NtabSPL6-1具有相互作用的蛋白质,它们可能通过互作共同参与和调控个体对食草动物或者微生物病原体的防御途径。具体的有关互作蛋白的信息和防御机制还有待进一步深入研究。