CDC23(Cell division cycle 23)和CDH1在中国卤虫早期胚胎发育中的作用

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中国卤虫(Artemia sinica)有很强的抗逆能力。在外界环境不利的情况下,中国卤虫可以形成保护性的滞育卵,而当条件再次适宜时,又能解除滞育并重新发育。  APC/C是后期促进复合物,作为典型的泛素连接酶,主要参与有丝分裂过程中特定蛋白的酶解。细胞分裂周期蛋白20相关蛋白1(Cell division cycle20 related protein1, CDH1)是APC/C的辅助因子之一,可特异性结合并激活APC/C复合物而发挥作用。细胞分裂周期蛋白23(Cell division cycle23,CDC23)在纺锤体组装检验点时期,同CDH1共同指导蛋白间相互降解过程,保证了染色体的正常分离。因此,CDC23和CDH1在中国卤虫早期胚胎的生长发育过程中也应该起着非常重要的作用,但其具体的调控机制还尚不清楚。  本论文,首次成功克隆得到了长度为1215bp的As-cdc23基因全长,共编码氨基酸146个,预测的蛋白分子量为17.1kDa。经过分析显示As-CDC23主要存在于细胞核,并且是一个不跨膜,且不分泌型的亲水性的蛋白质;蛋白比对分析发现CDC23在APC8结构域高度保守。整体免疫组化和免疫荧光的实验结果显示As-CDH1和As-CDC23存在于中国卤虫的各发育时期,表达部位不存在组织或器官特异性。qPCR和Western blotting实验从基因和蛋白两个水平分析了As-CDC23的表达模式和水平,结果显示中国卤虫0到15小时,表达量逐渐增强,并随着发育时间表达量逐渐降低;而在温度和盐度的胁迫下,基因和蛋白的相对表达量都呈现降低的趋势。与此同时,采用Western bloting的方法对细胞周期中相关蛋白的表达水平进行了分析,验证了蛋白间的复杂降解关系。  本研究证实了中国卤虫CDC23和CDH1在早期胚胎发育过程中参与降解下游蛋白,调节细胞周期;不仅如此,本论文还对脊椎动物中CDC23、CDH1的深入研究提供了一定的基础。
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