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背景:本组前期通过将小鼠肝癌腹水细胞注入小鼠足垫,经淋巴系统反复筛选,获得两株高度同源但淋巴道转移潜能差别显著的细胞株,Hca-F细胞株和Hca-P细胞株。Hca-F细胞株具有高转移潜能;Hca-P细胞株具有低转移潜能。我组先前研究发现,淋巴道高转移细胞中ANXA7在基因和蛋白水平的表达明显高于淋巴道低转移细胞,其表达水平与癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力呈正相关,提示ANXA7基因可能是参与肝癌淋巴道转移的关键基因之一。e EF1A1/A2是蛋白质翻译过程中的重要分子。近些年随着对其深入研究,发现e EF1A1/A2在多种恶性肿瘤中的异常高表达和癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力紧密相关。蛋白质是细胞功能的执行者,在细胞中常通过蛋白与蛋白之间的相互作用来调节各种生物学过程。因此,研究ANXA7与e EF1A1/A2之间的相关性,有利于进一步探讨它们在肿瘤增殖转移等方面的作用机制。目的:研究sh RNA抑制e EF1A1表达对肝癌Hca-P细胞凋亡、增殖、迁移的影响,并且通过分别下调e EF1A1和ANXA7的表达,检测其他相关基因在m RNA和蛋白水平表达量的变化,探讨Hca-P细胞中e EF1A1、e EF1A2与ANXA7表达的相关性及潜在的相互作用。方法:构建pGPU6/GFP/Neo-eEF1A1-shRNA质粒表达载体和其阴性对照p GPU6/GFP/Neo-NC-sh RNA。将Hca-P细胞分为空白对照组(CON),转染p GPU6/GFP/Neo-e EF1A1-sh RNA的e EF1A1-sh RNA转染组(e EF1A1-sh RNA)和转染p GPU/GFP/Neo-NC的阴性对照组(NC)三组细胞。瞬时转染48h后荧光显微镜下检测绿色荧光蛋白的表达量,应用CCK-8法、流式细胞仪和Transwell小室实验分别检测e EF1A1低表达对Hca-P细胞增殖、凋亡及迁移的影响。复苏本组先前建立并保存的ANXA7稳定下调的Hca-P细胞及其阴性对照组Hca-P细胞,实验中采用空白对照组(CON)、ANXA7-sh RNA稳定转染组(ANXA7-sh RNA)和阴性对照组(NC)三组Hca-P细胞进行对照。q RT-PCR和Western blot技术检测以上各组细胞中eEF1A1、eEF1A2及ANXA7基因在mRNA和蛋白水平的表达。结果:e EF1A1靶向sh RNA成功下调小鼠肝癌Hca-P细胞中e EF1A1基因的表达。流式细胞仪检测显示,CON组、e EF1A1-sh RNA组、NC组细胞凋亡率分别为2.85±0.37%、4.71±0.21%、3.01±0.33%,e EF1A1-sh RNA组的细胞凋亡较CON组和NC组明显增加(P<0.05);CCK-8实验显示,e EF1A1-sh RNA转染细胞后细胞增殖能力较CON组和NC组明显下降;Transwell实验显示,CON组、e EF1A1-sh RNA组、NC组迁移细胞数目为123.75±9.26,66.84±17.47,115.31±12.59,对比CON组和NC组,e EF1A1-sh RNA组细胞迁移能力有显著减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。综合以上结果,当转入的sh RNA抑制e EF1A1基因的表达后,肝癌细胞增殖及迁移能力显著降低,细胞凋亡显著增多。q RT-PCR和Western blot检测显示,e EF1A1-sh RNA转染组e EF1A2、ANXA7在m RNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组明显降低(P<0.05),并见细胞中e EF1A1与e EF1A2的比值(e EF1A1:e EF1A2)升高约1.8倍,ANXA7-sh RNA转染组e EF1A1、e EF1A2在m RNA和蛋白水平的表达量较CON组和NC组亦明显降低(P<0.05),二者在细胞中表达量的下降程度,尚未见明显差异。结论:通过靶向e EF1A1的sh RNA使e EF1A1低表达,可诱导细胞凋亡,抑制细胞的增殖能力及迁移能力。e EF1A1、e EF1A2与ANXA7的表达密切相关,且e EF1A1与ANXA7存在相互作用,可能共同参与调控肿瘤的发生与发展。