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一、目的以盐酸小檗碱（BBR）作为模型药物,研究盐酸小檗碱O/W型口服微乳（BBR ME）的处方及其制备工艺,建立BBR ME体外质量评价的基本体系；初步考察BBR ME在大鼠体内的药代动力学过程；对其在Caco-2细胞单层模型的跨膜转运进行研究,探讨P-gp对BBR ME透膜吸收的影响；以期为盐酸小檗碱等溶解性低,透膜性极差,同时又是P-gp底物的药物提供新剂型开发的思路,并为微乳的促吸收机制提供理论研究。二、方法1.处方前研究考察盐酸小檗碱在不同油相、表面活性剂和助表面活性剂中的溶解度,测定盐酸小檗碱在正辛醇/水体系中的油水分配系数及考察不同pH值对其的影响。2.盐酸小檗碱O/W型口服微乳的处方筛选选用肉豆蔻酸异丙酯、蓖麻油、油酸乙酯、辛酸葵酸甘油三酯、油酸聚乙二醇甘油酯为油相；吐温-80、吐温-20、辛酸葵酸聚乙二醇甘油酯、三油酸甘油酯、聚氧乙烯蓖麻油-35、聚氧乙烯氢化蓖麻油-40为表面活性剂；聚乙二醇-400、1,2-丙二醇、甘油、1,3-丁二醇、正丁醇、无水乙醇为助表面活性剂,进行配伍研究,选择对BBR溶解性较好的辅料进行处方研究,绘制伪三元相图,筛选出微乳区域面积较大的处方体系；以微乳离心稳定性及短期（2周）放置稳定性、平均粒径及粒径分散指数、微乳载药量等指标优选微乳处方。3.盐酸小檗碱O/W型口服微乳的体外质量评价建立HPLC法测定BBR ME中的药物含量；以肉眼与倒置显微镜观察所制备微乳的外观和形态；以离心法、稀释法、染色法和电导率法对微乳进行鉴别；以NANO-ZS90纳米粒度分析仪对微乳的平均粒径及粒径分布进行测定；以NDJ-7型旋转式粘度仪测定微乳的黏度；以DDS-11A型电导率仪测定微乳的电导率；利用长期（6个月）放置稳定性试验考察BBR ME的稳定性。4.盐酸小檗碱O/W型口服微乳在大鼠体内的初步药代动力学研究健康雄性SD大鼠随机分为2组,分别单剂量灌胃盐酸小檗碱混悬液和O/W型微乳,并于不同时间点进行眼眶取血,利用HPLC法测定大鼠血浆中的药物浓度,采用DAS2.1.1软件进行统计矩分析,计算药代动力学参数。5.盐酸小檗碱O/W型口服微乳在Caco-2细胞模型中的跨膜转运研究建立HPLC法测定转运液中的浓度,并进行方法学确证。利用Caco-2细胞单层模型研究盐酸小檗碱O/W型口服微乳的跨膜转运,比较相同浓度的盐酸小檗碱原料药溶液与微乳溶液在Caco-2细胞模型的转运差异,并考察P-gp抑制剂维拉帕米对BBRME跨膜转运的影响。运用HPLC法检测药物浓度,计算表观通透系数与外排率。三、结果1.处方前研究盐酸小檗碱在油相蓖麻油、油酸聚乙二醇甘油酯中的溶解度分别是0.2850mg·mL-1、0.1573mg·mL-1,在肉豆蔻酸异丙酯、油酸乙酯、辛酸葵酸甘油三酯中的浓度均低于检测限；盐酸小檗碱在表面活性剂与助表面活性剂中的溶解度相对较高。在37.0℃时,盐酸小檗碱在水中的表观油水分配系数为0.084（1gPapp=-1.08）；在pH值为1.0、2.0、11.0、12.0的缓冲液中,其油水分配系数分别为1.74、1.22、1.91、15.17；在pH值为3.0～10.0时,其油水分配系数极小,变化不大,1gPapp均小于0。2.处方筛选利用伪三元相图、微乳质量评价指标及载药量等综合因素筛选出以下两个处方体系：Ⅰ.蓖麻油/RH-40/1,2-丙二醇/水和Ⅱ.油酸聚乙二醇甘油酯/RH-40/甘油/水；处方优选的最终结果为油酸聚乙二醇甘油酯/RH-40/甘油/水=0.50：3.39：1.13：13.50（m/m/m/m）。3.体外质量评价载药微乳为澄清透明、均匀金黄色体系,平均载药量为2.32mg·mL-1,平均粒径为18.98nm,PDI为0.106；电导率为177.4μs·cm-1,黏度为5mPa·s。所制备微乳电导率较高,黏度低,符合O/W型微乳的特性；长期稳定性（6个月）放置试验表明,所制备微乳的外观、载药量、粒径分布等基本保持稳定。4.盐酸小檗碱O/W型口服微乳的初步药代动力学研究灌胃给予盐酸小檗碱混悬液和O/W型微乳后,其药动学参数如下：Cmax分别为（0.259±0.179）mg·L-1、（0.404±0.13）mg·L-1；AUC024分别为（1.681±0.558）mg·L-1·h、（4.963±2.952）mg·L-1·h,AUC0-∞分别为（2.223±0.810）mg·L-1·h、（9.790±8.410）mg·L-1·h；T1/2z分别为（9.761±6.611）h、（10.737±7.027）h。5.盐酸小檗碱O/W型口服微乳的跨膜转运研究BBR ME跨Caco-2细胞单层模型转运实验结果显示：相对于BBR组,BBR ME组从A→B转运方向的通透系数更大；相同浓度的三组盐酸小檗碱样品溶液从底端（B）到顶端（A）的转运程度均大于顶端（A）到底端（B）的转运程度,并在测定时间内随时间呈增长趋势；BBR ME组的外排转运量明显低于BBR组的外排量；BBRME+Ver组的外排转运量显著低于BBR ME组的外排转运量,均具有统计学差异。四、结论1.油水分配系数表明在水及pH值1.0～8.0的缓冲液中,盐酸小檗碱的1gPapp均小于1.0,提示其在机体正常生理pH环境中的胃肠道并不易被吸收；pH值对盐酸小檗碱的表观油水分配系数有一定影响,在一定范围内,pH值增加可使其分配系数增大。2.处方筛选得到盐酸小檗碱O/W型空白微乳的最佳处方是油酸聚乙二醇甘油酯/RH-40/甘油/水=0.50：3.39：1.13：13.50（m/m/m/m）。3.对所制备微乳进行了体外质量评价,主要是短期（2周）放置试验与长期（6个月）稳定性放置试验,盐酸小檗碱O/W型口服微乳在外观颜色、形态,粒径,载药量等方面均能保持良好的稳定性。4.药动学的研究结果显示,大鼠口服BBR ME的生物利用度大约是口服盐酸小檗碱混悬液的4.4倍,说明所制备的O/W型微乳能显著改善盐酸小檗碱在大鼠体内的吸收,提高口服生物利用度。5. Caco-2细胞模型的跨膜转运研究结果显示,盐酸小檗碱原料药溶液难以透过Caco-2细胞单层模型,O/W型微乳载体能促进盐酸小檗碱从A→B的转运量,初步认为BBR ME在细胞膜A→B方向的转运途径主要是通过被动转运；从B→A方向,BBR ME的外排转运量低于BBR溶液的外排转运量,P-gp能增加BBR ME的外排转运量,说明BBR在B→A方向的转运方式可能是有P-gp参与的主动转运；微乳载体在一定程度上可改善BBR的膜渗透性。