【摘 要】
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目的: 分离与培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并研究三氧化二砷(As2O3)对其凋亡的作用。方法: 采用细胞贴壁法分离纯化大鼠BMSC体外培养和传代,利用MTT法检测三氧化二砷对骨髓间充质干细胞增殖的影响,应用TUNEL法和Caspase-3活性检测法观察三氧化二砷对骨髓间充质干细胞凋亡的作用,并运用激光共聚焦显微镜观察三氧化二砷对骨髓间充质干细胞细胞内钙的影响,来探讨其引起细胞凋亡发生的机制
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目的: 分离与培养大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)并研究三氧化二砷(As2O3)对其凋亡的作用。
方法: 采用细胞贴壁法分离纯化大鼠BMSC体外培养和传代,利用MTT法检测三氧化二砷对骨髓间充质干细胞增殖的影响,应用TUNEL法和Caspase-3活性检测法观察三氧化二砷对骨髓间充质干细胞凋亡的作用,并运用激光共聚焦显微镜观察三氧化二砷对骨髓间充质干细胞细胞内钙的影响,来探讨其引起细胞凋亡发生的机制。
结果:
1、MTT实验结果显示三氧化二砷在对骨髓间充质干细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量依赖关系；药物浓度在10μmol/L时,作用24 h后,对细胞的抑制率为27.1±4.8％。
2、TUNEL实验结果显示三氧化二砷可以引起骨髓间充质干细胞发生凋亡,且具有剂量依赖性,随着药物剂量的增加发生凋亡的细胞数增加。
3、Caspase-3活性的检测结果说明不同浓度的三氧化二砷作用24 h可以引起骨髓间充质干细胞发生凋亡,且Caspase-3活性的增加呈现出对药物的剂量依赖性。
4、激光共聚焦显微镜结果显示药物浓度为10μmol/L时,三氧化二砷可显著升高骨髓间充质干细胞内钙水平,并且与细胞外钙无关。
结论: 三氧化二砷可通过增加细胞内钙的方式诱导大鼠骨髓间充质干细胞发生凋亡,这可能是其发挥抗肿瘤作用同时引起骨髓抑制的机制之一。
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