CN提取物抗肿瘤作用的实验研究

来源 :广西中医学院 广西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wgy_2003_9
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恶性肿瘤严重威胁着人类的健康和生命,近半个世纪来,运用中草药治疗恶性肿瘤,越来越被广大学者和患者接受,并已成为常用的治疗方法,是恶性肿瘤综合治疗中的有效手段之一。临床实验证明,中草药有较好抗肿瘤作用,不仅对化疗、放疗起减毒、增敏、增效的效应,而且能预防肿瘤复发转移。中草药以无明显毒副作用、药源广泛、价格低廉、宜长期应用等特点在恶性肿瘤治疗中显示其独特的优势。目前,对祖国传统医学宝库中的传统中草药进行大力开发,对其药理学作用给予新的理解,致力于研究开发出新的抗癌药物,大力弘扬祖国传统医学已成为当前中医药研究的发展趋势,在这样的大背景下,探讨CN提取物体内外抗肿瘤作用的分子机制,无疑是一项很有前景和研究价值的课题,是非常有意义的。   目的:本实验拟观察CN提取物体内外抗肿瘤作用,并确定其抗肿瘤的有效部位和有效成分;为扩大中医中药的应用范围,为把CN提取物开发为治疗肿瘤药物提供实验依据。   方法:CN药材用乙醇进行渗漉提取后,浸膏以系统溶剂分离进行部位分离,利用硅胶柱层析法对其正丁醇部位进行分离纯化,得到纯结晶化合物。在体外实验,采用MTT法、细胞集落形成法、生长曲线法测定CN提取物对白血病细胞株L1210和P388D1、宫顶癌细胞株Hela、人胃癌细胞株SGC7901、黑色素瘤细胞株B16、神经性肿瘤细胞株NG108-15、人肝癌细胞株BEL7404的生长抑制情况并用倒置显微镜、HE染色法观察细胞形态;在体内动物试验,观察CN提取物腹腔注射小鼠的急性毒理实验,计算出LD50的数值;建立S180小鼠肉瘤和H22肝癌腹水瘤模型,观察CN提取物不同部位对S180小鼠肉瘤抑瘤率、对H22肝癌腹水瘤生命延长率的影响。肿瘤组织行病理形态学及HE染色观察,全面分析体内外药理实验结果,并确定抗肿瘤的有效部位和有效成分。   结果:总提取物、正丁醇部位及多糖部位对人胃癌细胞株SGC7901、白血病细胞株L1210和P388D1、宫颈癌细胞株Hela、肝癌细胞株BEL7407、黑色素瘤细胞株B16、神经肿瘤细胞株NG108-15等7种不同组织来源的肿瘤细胞均有明显的抑制作用;在终浓度为62.5μg/ml范围,总提取物、正丁醇部位和多糖部位对上述7种肿瘤细胞的抑制率均大于80%,细胞抑制率均有明显的剂量依赖性,IC50均小于20μg/ml;从CN正丁醇部位中分离出9种单体化合物中,有7种化合物对上述7种肿瘤细胞有显著的抑制作用。CN正丁醇部位腹腔注射小鼠的LD50为105.11mg/kg,其95%可信区间为96.21~114.02mg/kg;CN多糖部位腹腔注射小鼠的LD50为99.81mg/kg,其95%平均可信区间为92.42~107.20mg/kg;CN正丁醇单体C9腹腔注射小鼠的LD50为31.02mg/kg,其95%平均可信区间为28.50~33.54mg/kg。动物体内实验显示,CN正丁醇部和多糖部位明显抑制S180和H22小鼠体内肿瘤的发生和发展,剂量为30mg/kg、20mg/kg、15mg/kg其抑瘤率分别为62.8%、46.75%、42.28%和43.19%、37.96%、31.82%;肿瘤组织切片HE染色,镜下观察,除见到大量坏死细胞外,部分肿瘤细胞体积较小,细胞核浓染。CN正丁醇部位和多糖部位能显著提高H22腹水瘤小鼠的生命延长率,生命延长率分别达到116.43%、44.52%、20.54%和109.52%、112.61%、115.01%。CN正丁醇部位抑瘤作用与剂量呈正相关关系,而多糖部位抑瘤效果与剂量关系不明显。   结论:CN提取物在体外对不同组织来源的肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用,并具有明显的量效关系。体内试验能延缓荷瘤小鼠的瘤体生长,明显延长荷瘤小鼠的生存期。其抗肿瘤的有效部位在正丁醇部和多糖部位,从正丁醇部位中分离出的单体C9是其抗肿瘤的主要成分。目前部分研究工作尚未结束,还有必要对CN进行更深入的研究。
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