碱性成纤维细胞生长因子影响RCS鼠体内视网膜前体细胞激活和增殖的实验研究

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目的:初步观察碱性成纤维细胞生长因子玻璃体内注射对皇家外科学院大鼠(royal college of surgeon rat,RCS)内源性视网膜前体细胞的影响。 方法:出生后日龄30天的RCS-p+大鼠和RCS-rdy+p+大鼠共32只,雌雄各半。其中RCS-p+大鼠24只随机分成三组,分别为bFGF组、溶剂对照组、空白对照组,每组8只。RCS-rdy+p+大鼠8只,作为正常对照组。分别于日龄的第31天、33天、35天对bFGF组RCS大鼠双眼玻璃体注射bFGF 6ul(1ug/10ul)。溶剂对照组玻璃体内注入同等体积的溶剂(一级水),空白对照组和正常对照组不作任何注射。于日龄36天时处死大鼠,取新鲜眼球,固定于4℃多聚甲醛室温下固定15min。冰冻切片加入兔抗大鼠Chx10一抗(chemicon,美国)及小鼠抗大鼠Nestin一抗(chemicon,美国)后4℃过夜。而后分别加入FITC-山羊抗兔荧光二抗、TRITC-羊抗小鼠荧光二抗(博士德,武汉),湿盒内37℃孵育60 min,荧光显微镜(ConfoCor2,ZEISS,德国)观察冰冻切片荧光表达。病理切片观察及电子显微镜超微结构观察。显微测厚仪测量光镜下外核层厚度,数据结果运用spss 13.0进行统计学分析。 结果:1.bFGF组视网膜Nestin和Chx10表达明显强于两对照组及正常组。bFGF组Nestin和Chx10表达强阳性,且可观察到二者共表达于视网膜各结构层次;溶剂对照组和空白对照组Nestin和Chx10表达弱阳性;正常对照组Nestin和ChxlO表达阳性,阳性强度较bFGF组为弱,但强于溶剂对照组与空白对照组。2.光镜下,bFGF组视网膜光感受器结构良好,外核层厚度较溶剂对照组与空白对照组增厚,且差异有显著性(P<0.01);溶剂对照组与空白对照组外核层厚度未见明显差异(P>0.05)。3.电镜下,bFGF组视网膜光感受器外节膜盘排列整齐有序,未见明显缺失,bFGF组视网膜外核层细胞结构良好,胞膜完整,未见明显凋亡及肿胀现象。溶剂对照组与空白对照组均可见细胞肿胀及细胞器的破坏。 结论:bFGF可以在RCS大鼠体内促进视网膜前体细胞激活,并可能通过促进其在体内进一步增殖分化以延缓光感受器细胞变性的进展。
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