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第一部分前软骨干细胞的分离、培养和鉴定目的:从SD大鼠乳鼠骺板分离纯化得到前软骨干细胞。方法:1.分离获得SD大鼠乳鼠股骨和胫腓骨干骺端骺板处软骨细胞,并应用免疫磁珠分选系统纯化得到前软骨干细胞,利用免疫荧光进行FGFR-3表型鉴定。2.对前软骨干细胞进行阿利新蓝染色。结果:1.分离纯化的前软骨干细胞形态均一,呈梭形或三角形。免疫荧光FGFR-3表型阳性。2.前软骨干细胞所形成的软骨团块阿利新蓝染色阳性。结论:本实验利用免疫磁珠分选系统成功获得前软骨干细胞。第二部分物理性低氧及化学性低氧对前软骨干细胞分化的影响目的:研究低氧刺激对前软骨干细胞分化的影响。方法:1.1%氧浓度刺激前软骨干细胞不同的时间以后检测HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG m RNA表达量的变化及HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表达量的变化。2.1%氧浓度刺激前软骨干细胞后予以常氧条件下培养检测HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表达量变化。3.不同浓度氯化钴刺激前软骨干细胞后检测HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG m RNA表达量的变化及HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG、ALP蛋白水平表达量的变化。结果:1.1%氧浓度刺激前软骨干细胞一定时间后HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG m RNA表达量均升高。HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表达量升高,而ALP蛋白表达量变化不明显。2.常氧环境下调由低氧刺激引起的HIF-1α、SOX9、COL-II和AGG蛋白水平表达量的升高。而ALP蛋白水平表达量并没有显著改变。3.一定浓度的氯化钴刺激前软骨干细胞后HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG m RNA表达量升高,并且HIF-1α、SOX9、COL-II、AGG蛋白水平表达量也有所升高,而ALP蛋白表达量变化不明显。结论:低氧能促进前软骨干细胞成软骨分化。第三部分物理性低氧及化学性低氧对前软骨干细胞YAP表达量的影响目的:研究低氧刺激前软骨干细胞后YAP表达量的变化。方法:1.1%氧浓度刺激前软骨干细胞不同时间后检测YAP m RNA及蛋白水平表达量的变化。2.1%氧浓度刺激前软骨干细胞后予以常氧条件下培养,检测YAP蛋白水平表达量的变化。3.不同浓度的氯化钴刺激前软骨干细胞后检测YAP m RNA及蛋白水平表达量变化。结果:1.1%氧浓度刺激前软骨干细胞一定时间后YAP m RNA及蛋白水平表达量升高。2.常氧环境下调由低氧刺激引起的前软骨干细胞YAP蛋白表达量的升高。3.一定浓度氯化钴刺激前软骨干细胞后YAP m RNA及蛋白表达量均升高。结论:低氧能影响前软骨干细胞YAP的的表达。