多杀性巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是由多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）引起的一种主要引发多种动物和人发生以传染性肺炎和出血性炎症为主要特征的急性、热性传染疾病。当前,多杀性巴氏杆菌疫苗的研究主要包括灭活疫苗、细胞弱毒苗,但因为Pm血清型众多和交叉保护效力低,对动物所能提供的保护效果不太理想,因此由必要研究新的候选疫苗。1、多杀性巴氏杆菌mip基因的克隆和分析在前期对Pm A型基因组分析过程中,发现了一个叫做Mip（Microphage infectivity potentiator,Mip）的外膜蛋白,可能作为候选疫苗抗原,免疫机体可产生较强的免疫保护作用。根据已有序列,利用Primer 5设计引物对,从Pm A型基因组PCR扩增mip基因片段。经测序和生物学信息学分析发现:mip基因由717 bp组成,编码238个氨基酸,相对分子质量为25.768 k D,在第8-25氨基酸区间存在一个膜结合区,24-25氨基酸位置存在信号肽区域,Pm Mip为一外膜蛋白。抗原表位分析表明,Mip蛋白序列上可能存在7个抗原决定簇。同源性分析发现,不同的Pm血清型Mip蛋白具有很高同源性。因此,推测Pm Mip具有良好的免疫原性,可能会诱导交叉免疫保护作用。2、重组多杀性巴氏杆菌Mip的免疫保护效果研究利用重组DNA方法,将mip基因插入到p ET28a（+）构建p ET-Mip重组质粒,转染到E.coli BL21细胞,IPTG诱导和SDS-PAGE检测重组菌可正确表达重组蛋白rMip（Recombinant Mip,rMip）。经Western blot检测,显示rMip具有良好的免疫原性。取SPF小鼠50只,随机分为5组,每组10只,分别于1 d、15 d、30 d和45 d皮下免疫:A组生理盐水组,B组弗氏不完全佐剂组,C组Mip低剂量（10μg）+弗氏不完全佐剂组,D组Mip中剂量（30μg）+弗氏不完全佐剂,E组Mip高剂量（50μg）+弗氏不完全佐剂。ELISA测定Ig G抗体滴度。第4次免疫两周后,以半致死剂量的Pm A型菌腹腔注射攻毒,记录感染后48 h小鼠情况。结果表明,免疫组（C、D、E组）可分别诱导小鼠产生20%、30%和30%保护率,对照组全部死亡。存活小鼠机体状态逐渐好转,并恢复采食。由此可见,免疫注射后可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的保护力。重组Mip蛋白免疫小鼠后具有一定的免疫保护作用,该结果为进一步筛选多杀性巴氏杆菌病疫苗积累了基础资料。