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玉米纹枯病是一种分布范围较广的世界性真菌病害,其病原菌主要是立枯丝核菌(Rhizoctonia solani kuhn),它具有强腐生性和宽寄主范围,目前尚未挖掘出高抗或免疫纹枯病的玉米新品种,玉米纹枯病的防治还主要依赖于化学防治和农业防治。为了得到具备广谱和持久抗性的玉米新种质,抵抗死体营养型病原菌诱发的病害,本研究利用农杆菌介导玉米遗传转化的方法将分别来源于苜蓿斜纹夜蛾昆虫杆状病毒和甜菜夜蛾中的凋亡抑制基因p35、iap同时导入玉米中。本实验分别构建了融合基因表达载体和双价表达载体。在构建融合基因表达载体中,依据目的基因p35和iap的编码区序列设计了6条引物；为了使两基因能够高效表达,除了使用连接多肽LP4/2A构建融合基因之外,设计引物时,我们对位于融合基因之前的p35基因的起始密码子的周边序列进行了优化,引入了Kozak序列,并在位于融合基因之后的iap基因和启动子之前引入了Ω序列,它是来源于烟草花叶病毒(TMV)富含TTAAC序列的非翻译前导序列,常作为增强子使用；从植物表达载体pCAMBIA1305.1-p35和pBI121-iap中分别扩增出p35和iap两个基因,p35基因的大小为900bp,iap基因的大小为1137bp；利用重叠PCR技术(overlapping PCR)将p35和iap两基因用连接多肽LP4/2A连接起来形成融合基因p35-LP4/2A-iap,置于玉米泛素启动子UBI-1之后,连接到植物表达载体pCABIA3301中,构建成融合基因表达载体pC A3301-p35-LP4/2A-iap.在构建双价表达载体时,将p35和iap基因各置于一套表达框内,p35基因由玉米泛素启动子UBI-1启动,置于植物表达载体pCAMBIA3301的多克隆位点中；iap基因由CaMV35S启动子启动,取代pCAMBIA3301上的gus基因,形成双价表达载体pCA3301-p35-iap。经PCR检测、酶切验证和全长测序验证,两表达载体上的各目的片段序列完整正确,连接无误。通过农杆菌介导玉米遗传转化方法将构建好的表达载体上的目的基因导入玉米自交系A188和综31中,共得到52株成活的转基因玉米,经巢氏PCR检测,共有19株转基因植株呈PCR阳性,初步确定外源基因已经整合到这19株转基因玉米的基因组中。对PCR检测为阳性的转基因植株的离体叶片接种立枯丝核菌(Rhizoctonia solani kiihn),观察发病情况。接种3天后,观察到对照植株的叶片发病比较严重,出现大块的病斑；而转基因植株中有6株的叶片发病较轻,只有零星的病斑,这6株转基因玉米对纹枯病表现了良好的抗性；并且转双价表达载体和转融合基因表达载体的转基因植株对纹枯病的抗性没有显著差异。