电化学免疫传感器检测动物肌肉组织中残留的青霉素

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青霉素是一种高效广谱抗生素类药物,广泛应用于预防及治疗奶牛疾病。但是,由于大量使用青霉素而造成在牛奶等动物源性食品中的残留,已经严重影响到人们的身体健康和进出口贸易。因此,研究制备检测灵敏、测试时间短、操作简便的青霉素传感器,对于规范奶、动物制品行业的健康发展和保障人民生活质量是非常重要的。目前,免疫传感器已逐步应用于临床检验、环境保护、食品和药物及农业分析等领域。本论文以新亚甲蓝为介体,利用共价键合法制备成电流型青霉素免疫传感器,研究了传感器的电化学行为、传感器的抗干扰性、样品回收率的测定和传感器的重现性、稳定性、再生能力以及在鸡肉、猪肉肌肉组织中的实际检测等问题。本论文主要内容概括如下:1、为了提高升该传感器的检出限,制备了CNBr-Sepharose 4B与BSA偶联的凝胶柱,其中偶联率达到84.7 %。为多克隆抗体的纯化作了前期的准备;合成出了两种针对氨苄青霉素的全抗原,其中BSA-Amp偶联数为11.994,OVA-Amp为10.879。为今后运用生物免疫方法筛选出青霉素的单克隆抗体作了铺垫。2、研究了新亚甲蓝(NMB)与HRP标记的青霉素抗体修饰于玻碳电极表面制备了青霉素免疫传感器,并运用这种传感器对鸡肉、猪肉等动物肌肉组织中青霉素的残留做了相应的检测,鸡肉中青霉素残留的检出限范围为5~45 ng/g,检出限为1.90 ng/g;猪肉中青霉素残留的检出限范围为5~50 ng/g,检出限为2.45 ng/g。并对该传感器的抗干扰性、再生能力以及影响因素等作了深入的探讨。3、由于抗生素(如青霉素等)在乳畜饲养业中的不合理使用,导致奶制品中抗生素残留问题突出,但人为添加了生鲜牛乳抗生素分解剂(其中有效成分为β-内酰胺酶)后,抗生素被分解,造成抗生素未检出的假象。而奶制品中β-内酰胺酶的存在会对消费者的健康形成隐患。所以本文建立起运用酸度计的方法检测了牛奶中β-内酰胺酶的残留,文中对青霉素酶的分解原理进行了分析,对实验中酸度计检测的缓冲容量、最适温度、底物浓度分别作了定量的总结。并且在奶样应用中得出随着β-内酰胺酶浓度的增加,青霉素分解的反应速率逐渐加快。β-内酰胺酶浓度在1~100 U/mL范围之间,呈线性关系,最低检出限为15 U/mL。在对照中加入了舒巴坦钠后,检出限有了一定的提升,达到8 U/mL。
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