发展检测肠病毒71型(EV71)感染之单克隆抗体研究

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目的:作为现今最为流行的嗜神经性病毒之一,肠病毒71型(enterovirus type71, EV71)近年来在亚太地区颇为盛行,引起各国政府高度重视。本课题旨在制备获得抗EV71单克隆抗体,鉴定并分析其应用及生物学功能,以探讨其于临床诊断治疗及抗病毒天然物筛选等方面的应用。方法:以EV71Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合,以EV71感染之RD(Human Rhabdomyosarcoma,人横纹肌肉瘤)细胞作为抗体筛选细胞,经IFA(Immunofluorescence assay,免疫荧光)反复筛选及克隆化培养,最终得到能够稳定分泌抗EV71单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株,并对其抗体亚型及特异性进行鉴定。对各株抗体在FCM(flow cytometry,流式细胞)、Western blot、capture-ELISA(抗原捕获ELISA)、病毒中和等实验中的应用进行分析,并通过peptide-ELISA(肽段-ELISA)鉴定得各自相应抗原识别表位。应用所得抗体进行病毒检测及天然萃取物抗病毒功效鉴定。结果:(1)共筛选得到5株能够分泌抗EV71单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27。除mAb26亚型为IgM,κ外,其余均为IgG2a,κ;(2)5株单克隆抗体,均可特异性识别EV71病毒,而不与CVA16(柯萨奇病毒A组16型)病毒、ECHO6(埃可病毒6型)病毒交叉反应;(3)抗体均可应用于IFA、FCM、Western blot、capture-ELISA等实验,进行EV71的检测及鉴定;(4)mAb22及mAb24具有EV71病毒中和作用;(5)除mAb27结合的抗原决定表位为病毒VP1的N-端线性表位:DVIESSIGDSVSRAL外,mAb21、mAb22、mAb24和mAb26均识别位于VP1的构象型抗原决定表位;(6)抗体可用于天然萃取物抗病毒功效鉴定等相关研究。结论:成功制备获得5株抗EV71单克隆抗体,并对其特性及功能应用进行鉴定。利用所制得抗体初步进行了天然萃取物抗病毒作用的鉴定。
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