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子宫内膜异位症(Endometriosis，EMT)是妇科常见病和多发病，育龄期妇女患病率高达10-15%，其中卵巢子宫内膜异位症是最常见的类型，约占55%。尽管其发病机制尚不明确，但一般认为子宫内膜异位症是一个由环境和遗传因素共同作用的多基因遗传病。前期我们采用IlluminaHumanMethylation450K甲基化芯片首次比较分析了6例卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜、异位内膜组织和6例对照妇女正常子宫内膜组织的DNA甲基化状态。其中IL-12B基因启动子区甲基化水平在三组间均有显著差异。而IL-12B基因多态性被证明与多种疾病存在相关性，因此我们从表观遗传和遗传学两个方面分析IL-12B基因在卵巢子宫内膜异位症发生发展中的作用。
第一部分IL-12B基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系研究
目的：探讨IL-12B基因启动子区甲基化水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：选取2014年10月到2016年8月在河北医科大学第四医院行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症患者68例为病例组，分别采集其在位内膜和异位内膜组织，选取同期因CINⅢ行全子宫切除术患者55例，取其子宫内膜组织为对照组。提取组织DNA，采用焦磷酸测序(pyrosequencing)技术检测所有组织标本IL-12B基因启动子区甲基化水平。采用KruskalWallis秩和检验分析在位内膜、异位内膜和正常内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平的差异。
结果：卵巢子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平明显低于非内异症患者正常内膜组织(P＜0.001)。
结论：IL-12B基因启动子区的异常甲基化可能在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中发挥着重要作用。
第二部分IL-12B基因mRNA表达水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的相关性研究
目的：探讨IL-12B基因mRNA表达水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：研究对象的选择同第一部分。提取组织RNA逆转录为cDNA，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测所有组织标本IL-12B基因mRNA的表达情况。采用KruskalWallis秩和检验分析在位内膜、异位内膜和正常内膜组织中IL-12B基因mRNA表达水平的差异。采用Spearman相关系数分析IL-12B基因启动子区甲基化与其mRNA表达水平的关系。
结果：卵巢子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织IL-12B基因mRNA表达水平明显高于非内异症患者正常内膜组织(P＜0.001)。相关性分析显示IL-12B启动子区甲基化与其mRNA表达水平呈负相关性(P＜0.001)。
结论：IL-12B基因启动子区异常甲基化水平可能是通过改变其mRNA表达水平而在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中起作用的。
第三部分IL-12B基因遗传多态性与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系研究
目的：探讨IL-12B基因遗传多态性(rs17860508和rs3212227)与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligase detectionreaction，PCR-LDR)检测815例卵巢子宫内膜异位症患者和788例对照妇女外周血淋巴细胞DNArs17860508和rs3212227两个多态位点基因型和等位基因型频率的分布情况。而且为了评估两个多态位点的生物学意义，采用qRT-PCR检测了45例卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组织中IL-12B基因mRNA的表达水平。
结果：rs17860508与卵巢子宫内膜异位症的发病风险明显相关。与CTCTAA/CTCTAA基因型相比，GC/GC和GC/CTCTAA基因型明显增加卵巢子宫内膜异位症的发病风险(OR=1.58，95%CI=1.19-2.09；OR=1.37，95%CI=1.08-1.74)；携带GC等位基因的人群较携带CTCTAA等位基因者有较高的患病风险(OR=1.25，95%CI=1.09-1.44)。且rs17860508位点GC/GC，GC/CTCTAA和CTCTAA/CTCTAA三种基因型的IL-12B基因mRNA的表达水平存在显著差异(P=0.032)。携带GC/GC基因型患者的在位子宫内膜组织中，IL-12B基因mRNA的表达水平明显高于携带GC/CTCTAA和CTCTAA/CTCTAA基因型患者。而rs3212227位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组间分布均无明显统计学差异(P＞0.05)。
结论：IL-12B基因启动子区rs17860508多态位点可能是通过改变IL-12B基因mRNA的表达水平而在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中起作用的。而IL-12B基因rs3212227位点可能与卵巢子宫内膜异位症的发病风险无关。
第一部分IL-12B基因启动子区异常甲基化与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系研究
目的：探讨IL-12B基因启动子区甲基化水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：选取2014年10月到2016年8月在河北医科大学第四医院行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症患者68例为病例组，分别采集其在位内膜和异位内膜组织，选取同期因CINⅢ行全子宫切除术患者55例，取其子宫内膜组织为对照组。提取组织DNA，采用焦磷酸测序(pyrosequencing)技术检测所有组织标本IL-12B基因启动子区甲基化水平。采用KruskalWallis秩和检验分析在位内膜、异位内膜和正常内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平的差异。
结果：卵巢子宫内膜异位症患者的异位和在位内膜组织中IL-12B基因启动子区甲基化水平明显低于非内异症患者正常内膜组织(P＜0.001)。
结论：IL-12B基因启动子区的异常甲基化可能在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中发挥着重要作用。
第二部分IL-12B基因mRNA表达水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的相关性研究
目的：探讨IL-12B基因mRNA表达水平与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：研究对象的选择同第一部分。提取组织RNA逆转录为cDNA，采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测所有组织标本IL-12B基因mRNA的表达情况。采用KruskalWallis秩和检验分析在位内膜、异位内膜和正常内膜组织中IL-12B基因mRNA表达水平的差异。采用Spearman相关系数分析IL-12B基因启动子区甲基化与其mRNA表达水平的关系。
结果：卵巢子宫内膜异位症患者异位和在位内膜组织IL-12B基因mRNA表达水平明显高于非内异症患者正常内膜组织(P＜0.001)。相关性分析显示IL-12B启动子区甲基化与其mRNA表达水平呈负相关性(P＜0.001)。
结论：IL-12B基因启动子区异常甲基化水平可能是通过改变其mRNA表达水平而在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中起作用的。
第三部分IL-12B基因遗传多态性与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系研究
目的：探讨IL-12B基因遗传多态性(rs17860508和rs3212227)与卵巢子宫内膜异位症发病风险的关系。
方法：采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(polymerase chain reaction-ligase detectionreaction，PCR-LDR)检测815例卵巢子宫内膜异位症患者和788例对照妇女外周血淋巴细胞DNArs17860508和rs3212227两个多态位点基因型和等位基因型频率的分布情况。而且为了评估两个多态位点的生物学意义，采用qRT-PCR检测了45例卵巢子宫内膜异位症患者在位内膜组织中IL-12B基因mRNA的表达水平。
结果：rs17860508与卵巢子宫内膜异位症的发病风险明显相关。与CTCTAA/CTCTAA基因型相比，GC/GC和GC/CTCTAA基因型明显增加卵巢子宫内膜异位症的发病风险(OR=1.58，95%CI=1.19-2.09；OR=1.37，95%CI=1.08-1.74)；携带GC等位基因的人群较携带CTCTAA等位基因者有较高的患病风险(OR=1.25，95%CI=1.09-1.44)。且rs17860508位点GC/GC，GC/CTCTAA和CTCTAA/CTCTAA三种基因型的IL-12B基因mRNA的表达水平存在显著差异(P=0.032)。携带GC/GC基因型患者的在位子宫内膜组织中，IL-12B基因mRNA的表达水平明显高于携带GC/CTCTAA和CTCTAA/CTCTAA基因型患者。而rs3212227位点基因型和等位基因频率在病例组和对照组间分布均无明显统计学差异(P＞0.05)。
结论：IL-12B基因启动子区rs17860508多态位点可能是通过改变IL-12B基因mRNA的表达水平而在卵巢子宫内膜异位症的发生发展中起作用的。而IL-12B基因rs3212227位点可能与卵巢子宫内膜异位症的发病风险无关。