书虱分子鉴定、生殖进化及比较线粒体基因组学研究

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书虱(booklice)隶属于啮虫目Psocoptera,书虱科Liposcelididae,书虱属Liposcelis Motschulsky 1852,是一类世界广泛分布的重要仓储害虫,可随进出口贸易和旅客携带等远距离传播。我国口岸检疫部门截获书虱的次数逐渐增多,对国际贸易的影响日趋严重。书虱个体微小,形态鉴定困难,其种类的快速准确鉴定技术成为检疫口岸等部门亟需解决的问题;研究书虱不同生殖方式的进化关系,对防控书虱的扩散并制定合理的防治措施等具有重要的指导意义;对书虱种类线粒体基因组测序和分析并比较书虱种群间,书虱属种间以及啮虫目亚目间的线粒体基因组结构特点,对于推动昆虫比较线粒体基因组学以及线粒体基因组进化研究等具有重要意义。本研究针对10种常见仓储书虱,测定了43个地理种群的155条线粒体COI序列,针对8种常见仓储书虱设计并筛选出8对特异引物;基于线粒体12S和16S对嗜卷书虱L. bostrychophila (Badonnel)的Arizona有性生殖和13个孤雌生殖地理种群进行系统发育分析;对嗜卷书虱的Arizona有性生殖5头雌虫和8头雄虫个体,以及孤雌生殖的9个地理种群21头个体进行共生菌的检测;对4种书虱12个地理种群的线粒体基因组序列进行扩增,结合已发表的其他啮虫线粒体基因组序列进行比较线粒体基因学研究。主要研究结果如下:(1)制定了10种常见仓储书虱的形态特征检索表,并构建了DNA条形码库,形成了书虱DNA条形码鉴定技术体系,实现了10种常见仓储书虱的DNA条形码鉴定。(2)基于构建的DNA条形码序列库,设计并筛选出8种常见仓储书虱的特异引物对,形成快速鉴定试剂盒,实现了8种常见仓储书虱强特异性和高灵敏度的快速鉴定。(3)明确了嗜卷书虱Arizona有性生殖的种群中存在两个单倍型(HI和HII),系统发育树显示嗜卷书虱有性生殖方式可能由孤雌生殖方式进化而来,初步提出嗜卷书虱由孤雌生殖向有性生殖进化的假说。(4)仅在嗜卷书虱所有孤雌生殖个体中检测到共生菌Rickettsia,该类共生菌可能在嗜卷书虱的孤雌生殖中发挥着重要作用。(5)已检测啮虫线粒体基因组中,仅嗜卷书虱线粒体基因组发生裂化,形成两个环状闭合双链DNA环;其他啮虫线粒体基因组均为完整的闭合单环。(6)嗜卷书虱不同地理种群的裂化方式不同,共检测到3种不同的线粒体基因组裂化方式,其中一种裂化方式可能是另外两种的过渡形式。(7)书虱属5个不同种类的线粒体基因组均发生高频率的重排,且同一属内重排方式差异巨大,书虱种类的重排方式没有特定的规律可循。(8)啮虫目三个亚目的进化速率从高到低依次是:粉啮亚目>窃啮亚目>啮亚目。(9)COI基因是啮虫目种类中进化最保守的基因。嗜卷书虱不同地理种群间COI全序列的两两比对相似度仅为82.5%,使用DNA条形码进行该种鉴定时需重新界定种内遗传距离。
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