背景：　　 肺癌是我国发病率、死亡率最高的癌症。过去30年我国肺癌死亡率上升465％，卫生部统计数据显示，肺癌已经成为中国恶性肿瘤的第一位死亡原因。非小细胞肺癌约占肺癌总数的80-85％，与小细胞癌相比，其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。近些年，在化疗的成效上，非小细胞肺癌确实有显著的进步，无论是从肿瘤缩小的局部控制率上（单一药物反应率10-30％，两种化疗药物治疗反应率35-45％），还是从缓和病程进展、改善症状方面都有所突破，然而在延长病患存活时间上，即使配合放射治疗、手术等，仍无明显进展。因此，寻找效果更好的药物来预防和治疗肺癌是目前亟待解决的问题。　　 姜黄素是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取的一种化学成分，其中，姜黄约含3-6％，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。姜黄素为橙黄色结晶粉末，味稍苦。现代研究发现姜黄素可以抑制炎症反应、抗氧化、抗类风湿的作用。美国VITY维他命杂志报道:“姜黄素的主要药理作用有抗氧化、抗炎、抗凝、降脂、抗动脉粥样硬化、抗衰老消除自由基及抑制肿瘤生长等。”美国肿瘤研究所将其列为第三代癌化学预防药。姜黄素抗肿瘤的作用机制是多种多样的，如抑制细胞增殖，诱导细胞凋亡，抗氧化和清除氧自由基等。姜黄素对非小细胞肺癌有抑制作用，有研究表明姜黄素可以抑制非小细胞肺癌细胞的增殖，诱导其发生周期阻滞或者凋亡，但其具体机制尚不清楚。　　 钙池操纵的Ca2+通道(SOC)广泛存在于细胞膜上，是非兴奋性细胞胞外Ca2+内流的主要通道。1986年James Putney首次提出库容性钙内流（capacitativeCa2+entry，CCE）概念，现在称之为钙池调控钙内流(store-operated calcium entry，SOCE)，是指ER中Ca2+浓度下降诱发细胞外Ca2+内流的过程。自这一过程被揭示以来，SOCE几乎在所有细胞中存在，参与细胞的分泌、生长、控制、淋巴细胞激活和免疫等重要功能。随着RNA干扰技术的发展，SOCE过程中两个重要分子被确定: STIM1(Stromal interaction molecule1，基质相互作用因子1)和Orai1。SOCE主要引起外钙内流，SOCE是否在姜黄素诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡中发挥作用，尚未见有报道。因此，本研究主要探讨SOCE是否参与姜黄素诱导非小细胞肺癌细胞凋亡过程，为开发姜黄素作为肿瘤治疗药物提供理论支持。　　 目的：　　 探索STIM1和Orai1是否参与姜黄素诱导的非小细胞肺癌A549的凋亡;　　 探索STIM1和Orai1在姜黄素诱导A549细胞凋亡中的机制。　　 方法：　　 1.将非小细胞肺癌细胞株A549细胞置于37℃培养箱内培养(5％CO2、95％空气)，分别不同浓度的姜黄素处理A549细胞不同时间后，MTT法检测细胞增殖活力。　　 2.细胞铺板24h后，用不同浓度姜黄素处理24h，收集细胞流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化。　　 3.荧光定量PCR的方法来检测姜黄素处理后A549细胞上STIM1和Orai1在mRNA水平上的变化。　　 4.免疫印迹法检测不同浓度姜黄素作用对STIM1和Orai1蛋白表达水平的影响。　　 5.通过siRNA干扰的方法下调A549细胞上STIM1和Orai1的表达，并通过免疫印迹的方法来检测siRNA的干扰效率。　　 6.通过转染野生型STIM1质粒和野生型Orai1质粒的方法来过表达STIM1和Orai1，并通过免疫印迹检测野生型STIM1和Orai1质粒的过表达效率。　　 7.流式细胞仪的方法检测STIM1和Orai1干扰和过表达后细胞凋亡率的变化。　　 结果：　　 1.姜黄素可诱导A549细胞凋亡不同浓度的姜黄素处理非小细胞肺癌A549细胞12、24、48小时后，四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力，结果显示，24小时后细胞的抑制作用明显升高，与对照组比较之间差异具有统计学意义(P＜0.01)。不同浓度的姜黄素处理A549细胞24小时后，流式细胞仪检测细胞凋亡率，结果显示，25μmol/L姜黄素处理24小时后细胞凋亡率与对照组比较明显升高并具有统计学意义(P＜0.01)。以上结果表明，姜黄素可诱导非小细胞肺癌细胞A549凋亡，并具有剂量和时间反应关系。　　 2.姜黄素对A549细胞STIM1和Orai1mRNA表达的影响姜黄素处理A549细胞24h后发现STIM1和Orai1的mRNA表达水平有明显下降(P＜0.01)。　　 3.姜黄素对A549细胞STIM1和Orai1蛋白表达水平的影响不同浓度姜黄素处理A549细胞24h后发现STIM1和Orai1的蛋白表达水平发生下降。　　 4.siRNA干扰STIM1和Orai1后，免疫印迹的方法检测干扰效率，结果显示在A549细胞上，STIM1-siRNA1的干扰效率为57％，STIM1-siRNA2的干扰效率为75％，Orai1-siRNA1的干扰效率为49％，Orai1-siRNA2的干扰效率为50％; STIM1和Orai1干扰后，25μmol/L姜黄素处理A549细胞24小时后，流式细胞仪检测细胞凋亡率，数据显示干扰后姜黄素处理组与对照组比较细胞凋亡率上升。　　 5.把空质粒、野生型STIM1和Orai1质粒分别转染到非小细胞肺癌A549细胞中，免疫印迹方法检测发现STIM1质粒的转染效率为216％(图10)，Orai1质粒的转染效率为154％（图11）;STIM1和Orai1野生型质粒过表达后，25μmol/L姜黄素处理A549细胞24小时，流式细胞仪检测细胞凋亡率，数据显示过表达后姜黄素处理组与对照组比较细胞凋亡率下降。　　 结论：　　 1.姜黄素可诱导非小细胞肺癌细胞A549细胞凋亡，并具有剂量和时间反应关系。　　 2.姜黄素处理后导致细胞内STIM1和Orai1的mRNA和蛋白水平表达量下调，姜黄素可能通过抑制STIM1和Orai1的mRNA表达，进一步抑制STIM1和Orai1的蛋白表达，最终导致细胞凋亡。　　 3.STIM1和Orai1干扰后细胞凋亡率上升，STIM1和Orai1过表达后细胞的凋亡率下降，进一步证明STIM1和Orai1通过自身表达量的改变参与姜黄素诱导的非小细胞肺癌A549细胞凋亡。