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肿瘤耐药是影响肿瘤治疗效果的主要问题。肿瘤细胞产生耐药的机制及如何逆转耐药依旧是亟待解决的重要问题。已知肿瘤耐药机制包括肿瘤细胞内药物泵出增多、体内非特异解毒过程加强、DNA损伤修复能力增强、细胞凋亡抑制等。最近有研究发现,以转录因子Nrf2为主体的Nrf2-Keapl-ARE信号通路可能串连多种耐药机制,从而解释多种肿瘤耐药的原因,因此本课题利用卵巢癌A2780cp、A2780、SKOV3、Hey细胞株,研究Nrf2蛋白在卵巢癌顺铂耐药及敏感细胞株中的表达情况,观察Nrf2siRNA干扰细胞株后Nrf2表达及耐药情况的变化,希望为卵巢癌顺铂耐药的综合治疗提供理论基础。本实验主要分为以下两部分：一.多种卵巢癌细胞株对顺铂的耐药性及Nrf2蛋白在其中的表达目的：了解顺铂对卵巢癌细胞株A2780cp、A2780、SKOV3、Hey四种细胞增殖的抑制作用及Nrf2在A2780cp、A2780、SKOV3、Hey细胞株中的表达情况。方法：卵巢癌A2780cp、A2780、SKOV3、Hey细胞株复苏后培养,将四种细胞株分为两组：组为A2780cp及A2780,另一组为SKOV3及Hey。应用SRB方法检测顺铂对A2780cp、A2780、SKOV3、Hey四种细胞株增殖的抑制作用,其中顺铂浓度取1μg／ml,2μg／ml,4μg／ml,8μg／ml。观察72hr。应用western-blot方法检测四种细胞株中Nrf2蛋白表达情况。应用SPSS16.0软件对数据进行统计分析,所有数据采用单因素方差分析。结果：顺铂对卵巢癌细胞株A2780cp、A2780、SKOV3、Hey均有增殖抑制作用,其抑制作用与浓度呈正相关。对每组中：A2780cp和A2780,SKOV3和Hey细胞抑制率行统计学分析,各浓度间抑制率比较p<0.05。说明A2780cp和SKOV3为顺铂相对耐药细胞株,A2780和Hey为顺铂相对敏感细胞株。Nrf2在卵巢癌细胞株A2780、Hey中呈相对低表达,在卵巢癌细胞株A2780cp、SKOV3中呈相对高表达。每组中两细胞间表达差异比较p<0.05。二.Nrf2 siRNA转染后卵巢癌细胞株中Nrf2蛋白表达变化及细胞株对顺铂敏感性的变化目的：了解经Nrf2 siRNA转染后卵巢癌细胞株对顺铂敏感性的变化情况。方法：以6孔板培养卵巢癌细胞株A2780cp、A2780,将Nrf2 siRNA(终浓度为30 nM)加入其中,作用6-8h；采用western-blot方法检测细胞中Nrf2蛋白表达情况。以96孔板培养卵巢癌细胞株A2780cp、A2780,将Nrf2 siRNA(终浓度为30 nM)加入其中,作用6-8h；应用SRB检测顺铂对A2780cp、A2780cp_kd、A2780、A2780_kd细胞株增殖的抑制作用,摸索实验条件后调整顺铂浓度,顺铂浓度取A2780cp及A2780cp_kd：4μg／ml,8μg／ml,16μg／ml,32μg／ml：A2780及A2780_kd：1μg／ml,2μg／ml,4μg／ml,8gg／ml,观察72hr。采用流式细胞仪检测卵巢癌细胞株A2780cp及A2780cp_kd经顺铂作用72hr后凋亡情况。应用SPSS16.0软件对数据进行统计分析,所有数据采用单因素方差分析。结果：经Nrf2 siRNA转染后,Nrf2在卵巢癌细胞株A2780cp中表达量前后比较p<0.05；而在卵巢癌细胞株A2780中表达量前后比较p>0.05。顺铂对转染后的卵巢癌A2780cp细胞株增殖抑制作用明显增强,与卵巢癌A2780细胞株相比无明显差别。各浓度之间抑制率比较p<0.05。经顺铂作用72hr后,卵巢癌细胞株A2780cp_kd存活率明显低于A2780cp细胞株,抑制率比较p<0.05。结论：本实验结果提示,顺铂对卵巢癌细胞株A2780cp、SKOV3的生长抑制作用明显低于对卵巢癌细胞株A2780、Hey增殖的抑制作用。Nrf2在卵巢癌细胞株A2780cp、SKOV3中呈高表达,在卵巢癌细胞株A2780、Hey中呈低表达。Nrf2 siRNA可抑制Nrf2蛋白在卵巢癌细胞中的表达,Nrf2蛋白表达被干扰后,卵巢癌A2780cp细胞株的顺铂耐药性被逆转,其作用结果与对顺铂敏感的卵巢癌A2780细胞株相似。由此可见Nrf2蛋白与卵巢癌细胞顺铂耐药有一定相关性。