【摘 要】
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目的初步探讨shRNA沉默her-2基因对人骨肉瘤细胞株saos-2中血管生成相关因子VEGF-A和IL-8表达的影响及意义。方法构建her-2shRNA重组表达载体,采用脂质体介导法转染至人骨肉瘤
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目的初步探讨shRNA沉默her-2基因对人骨肉瘤细胞株saos-2中血管生成相关因子VEGF-A和IL-8表达的影响及意义。方法构建her-2shRNA重组表达载体,采用脂质体介导法转染至人骨肉瘤细胞株saos-2,并经G418筛选出稳定转染的细胞株,同时设不转染的空白对照组和转染阴性载体的shNC组;采用倒置荧光显微镜及流式细胞术对转染效果进行评价;采用RT-PCR、Western blot检测转染前后her-2mRNA和蛋白表达水平,评估抑制效果;RT-PCR检测转染前后VEGF-A和IL-8基因mRNA的转录水平;ELISA法检测转染前后细胞培养上清液中VEGF-A和IL-8的蛋白分泌水平。结果经测序证实重组质粒her-2-shRNA构建成功,并成功将her-2-shRNA稳定转染至saos-2细胞中。构建获得的her-2shRNA重组质粒能显著抑制her-2基因的表达,其对her-2mRNA的转录和蛋白表达的抑制率分别为63.05%和62.59%;RT-PCR、ELISA检测结果显示,相对于空白对照组和shNC阴性对照组,her-2shRNA组VEGF-A、IL-8基因的mRNA的表达水平及蛋白分泌水平显著下调(P﹤0.01)。结论her-2-shRNA可显著下调her-2基因在人骨肉瘤saos-2细胞中的表达水平,并能抑制VEGF-A、IL-8基因mRNA的转录和蛋白分泌水平;her-2基因参与了人骨肉瘤细胞VEGF-A、IL-8的表达调控,her-2基因可作为研究骨肉瘤血管生成分子机理的新靶点。
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