【摘 要】
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研究背景整合素受体αvβ3在肿瘤新生血管及部分肿瘤细胞中高表达。课题组前期利用RGD环肽可与整合素αvβ3受体特异性结合特点,以小分子化合物将两个RGD环肽与siRNA分子通过共价偶联得到biRGD-siRNA分子,用于肿瘤靶向治疗。biRGD-siRNA可通过RNA干扰原理靶向沉默目的基因的表达,在基因水平治疗疾病。前期结果提示biRGD-siRNA分子可增强细胞摄取、促进内体释放并靶向体内肿瘤
【基金项目】
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国家自然科学基金； 广州市科技计划项目；
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研究背景整合素受体αvβ3在肿瘤新生血管及部分肿瘤细胞中高表达。课题组前期利用RGD环肽可与整合素αvβ3受体特异性结合特点,以小分子化合物将两个RGD环肽与siRNA分子通过共价偶联得到biRGD-siRNA分子,用于肿瘤靶向治疗。biRGD-siRNA可通过RNA干扰原理靶向沉默目的基因的表达,在基因水平治疗疾病。前期结果提示biRGD-siRNA分子可增强细胞摄取、促进内体释放并靶向体内肿瘤组织新生血管、沉默目的基因表达,表现出一定的抑制肿瘤生长的药效。但是否具有成药性,还需要进一步的研究,如在体内使用的药代动力学及安全性需要详细的评价。但国内外对siRNA药物的药代动力学研究较少,尚没有成熟方法对biRGD-siRNA分子进行体内定量研究,更没有对肿瘤部位的biRGD-siRNA分子进行定量研究。目的建立准确可靠的biRGD-siVEGFR2分子体内定量方法,探讨分子在体内的组织分布、生物利用度同时研究其体内应用的急性毒性。方法1.建立可测定biRGD-siRNA分子在脏器及血清中浓度的定量方法。2.测定siVEGFR2、cRGD-siVEGFR2 及 biRGD-siVEGFR2 浓度,比较三者在体内的血清稳定性并考察剂量对biRGD-siVEGFR2血清稳定性影响。3.考察biRGD-siVEGFR2在小鼠体内的组织分布及生物利用度。4.建立肿瘤模型及肿瘤组织中biRGD-siVEGFR2定量方法,研究biRGD-siVEGFR2在肿瘤模型鼠中的组织分布及生物利用度。5.小鼠尾静脉注射50 nmol biRGD-siVEGFR2,研究其急性毒性。结果1.成功建立茎环实时PCR方法用于biRGD-siVEGFR2体内定量研究,标准曲线线性关系好,R2均达到0.99以上,最低检测限达到检测要求。2.与 siVEGFR2、cRGD-siVEGFR2 相比,biRGD-siVEGFR2 显著增加了 siRNA的t1/2、Cmax和AUC并降低CL。3.随剂量增加,biRGD-siVEGFR2显著增加其t1/2、Cmax和AUC。4.biRGD-siVEGFR2仅在小鼠肾脏中被检测到,其t1/2为69分钟、Cmax为64605 ng/g、AUC0-t为1581966 ng/g*min。5.通过比较正常小鼠与肿瘤模型鼠组织分布,biRGD-siVEGFR2靶向于肿瘤组织。与肾脏相比,肿瘤部位t1/2增加1.5倍、Cmax增加3.26倍、AUC增加5.6倍、CL降低4.9倍。6.急性毒性实验中,与对照组相比,给药组小鼠体重变化、脏器系数、生化血液学指标、血液学指标均无统计学差异。病理切片结果显示与对照组相比,给药组的心、肝、脾、肺、子宫、睾丸均未见异常。给药组3例肾脏组织出现肾小管上皮细胞肿胀变性。结论本研究成功建立稳定可靠的茎环实时PCR方法对biRGD-siVEGFR2定量,结果提示biRGD-siVEGFR2可增强体内siRNA化合物在血清稳定性且与剂量成正比。biRGD-siVEGFR2可特异性靶向肿瘤部位且在肿瘤部位生物利用度最高。高剂量下biRGD-siVEGFR2安全低毒。
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