兔粪样大豆异黄酮转化菌株的分离鉴定及转化特性研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:flysnake
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大豆异黄酮是大豆等蝶形花亚科植物产生的黄酮类次级代谢产物,主要分布于大豆、苜蓿等极少数植物中。迄今已知的大豆异黄酮共有12种异构体,其中包括3种苷原形式,即黄豆苷原(daidzein)、染料木素(genistein)和黄豆黄素(glycitein),另外9种以葡萄糖苷形式存在。体内试验表明,哺乳动物摄入体内的大豆异黄酮糖苷被肠道微生物菌群产生的葡萄糖苷酶水解为苷原,或被机体直接吸收,或在肠道微生物菌群作用下被降解为二氢黄豆苷原(dihydrodaidzein,简称DHD)、雌马酚(equol)、去氧甲基安哥拉紫檀素(O-desmethylangolensin,简称O-Dma)、二氢染料木素(dihydrogenistein,简称DHG)和5-羟基-雌马酚(5-hydroxyequol)等不同代谢产物。本研究首次从兔粪样菌群中分离得到2株对大豆异黄酮有转化功能的细菌菌株,我们将其分别命名为菌株AUH-JLR41(KJ188150)和菌株AUH-JLR23(KJ188151)。经BLAST比对,发现菌株AUH-JLR41的16S rDNA序列与斯奈克氏菌属菌株Slackiaequolifaciens DZE(EU377663)的相似性最高,相似性为99.6%;菌株AUH-JLR23与梭菌属菌株Clostridium sp. TM-40(AB249652)相似性最高,相似性为97.12%。结合菌体形态和革兰氏染色等,将菌株AUH-JLR41鉴定为斯奈克氏菌属菌株,即Slackia sp.AUH-JLR41,将菌株AUH-JLR23鉴定为梭菌属菌株,即Clostridium sp. AUH-JLR23。通过高效液相色谱检测发现,菌株AUH-JLR41和菌株AUH-JLR23代谢底物黄豆苷原和染料木素后生成的产物的HPLC保留时间和紫外吸收图谱与DHD和DHG标准品完全相同。因而,将菌株AUH-JLR41和菌株AUH-JLR23代谢底物黄豆苷原和染料木素后生成的产物鉴定为DHD和DHG。通过质谱分析(ESI-MS)发现,菌株AUH-JLR41代谢底物黄豆苷原后生成的产物的分子量为256,这与DHD的分子量相吻合;菌株AUH-JLR41代谢底物染料木素后生成的产物的分子量为272,这与DHG的分子量相吻合。通过手性柱分析发现,菌株AUH-JLR41和菌株AUH-JLR23代谢底物黄豆苷原和染料木素后生成的产物的对映体过量率均为0%e.e.。此外,对菌株AUH-JLR41和菌株AUH-JLR23的转化动态和转化能力进行了测定。
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