论文部分内容阅读
目的： 在肺损伤中血管的修复和新生是肺损伤的修复和肺功能的恢复的最基本条件之一。在血管损伤修复与血管新生中起重要作用的细胞因子在纤维化的发生发展过程中可能同样起着重要作用。VEGF是血管内皮细胞的特异有丝分裂原，能促进内皮细胞的增殖、分化，它能够诱导并形成大量新生血管。TGF-β1在体内可刺激新生血管形成。TGF-β1促进周细胞的成熟，在血管发生形成期起作用。这两种因子均与血管损伤修复和血管新生密切相关。为进一步阐明在博莱霉素损伤肺组织中对血管损伤与新生具有重要作用的VEGF和TGF-β1的表达特征及其与血管损伤修复和成纤维细胞增殖间的关系，本实验用免疫组化、原位杂交、光镜和透射电镜的方法动态观察了博莱霉素致鼠肺纤维化形成过程中TGF-β1与VEGF的合成及分布规律及其与微血管病理和细胞外基质沉积的关系，以探讨其与肺血管新生的关系及在肺纤维化的发生发展中的意义。 材料与方法： 健康SD大鼠80只，雌雄不拘，体重170～220g（由本校实验动物中心提供）。随机分为2组，每组各40只。实验组（40只）用10g．L-1 算口旱区大学硕士少也快文戊巴比妥钠60mg．kg－‘)腹腔麻醉大鼠，仰卧固定在鼠台上。颈部酒精消毒后逐层暴露气管，用 IInl注射器抽取含博莱霉素外 6．kg’，用生理盐水配成4g．L‘溶液，由天津太河制药有限公司生产，sing／支，批号00 1014)溶液，接7号头皮针上，经气管软骨环间隙朝向心端刺人气管，回拍见空气无阻力后，将药液注人气管。注人过程中将大鼠直立、旋转，使药液在肺内分布充分、均匀。对照组在同样条件下气管内注人相同数量的生理盐水，方法同实验组。两组动物分别于3、7、14、ZI和 28d各随机处死 8只。10g．L‘戊巴比妥钠（50mg＊：‘）腹腔麻醉大鼠后，颈动脉放血法处死大鼠，无菌术开胸，取左全肺（取少量肺组织送扫描电镜观察）用4％多聚甲醛川．IPBS，含有 lll000DEPC的固定液，密封、负压排气使肺组织固定充分、及时。常规脱水、石蜡包埋。沿肺门至胸膜最大切面取材，制成6tim厚石蜡切片（原位杂交载玻片预先用DEPC浸泡、APES处理）。免疫组织化学染色采用SABC法，VEGF及TGF小 免疫组化试剂盒为武汉Boster公司产品。用 PBS代替一抗作空白对照。依试剂盒说明操作。VEGF及 TGF小 l原位杂交试剂盒购自武汉BOStCf公司。无探针杂交液作空白对照。按试剂盒说明操作。结果：1．博莱霉素大鼠VEGF与TGF－pl从3d开始表达明显增强，表达 这两种因子的主要是肺泡巨噬细胞。此后VEGF与TGF－PI高表 达持续存在，并呈平行增长，在肺内间质细胞的表达以28d分布 最广，从IW组开始，表达这两种因子的细胞向间质细胞过度。2．3d组肺毛细血管内皮细胞可见坏死、脱落、通透性增高，此后大 量毛细血管新生。光镜下1周组肺内毛细血管已基本得到修复， 肺泡内已无红细胞。但透射电镜下可见新生血管扭曲，通透性高。 －3一 窜回二巨大吵硕士学位论文 肺泡毛细血管基底膜不连续且可见血管内血栓形成。这种血管损 伤变化在28d组仍然存在。28d组仍可见血管内皮细胞增生活跃。3．血管新生与VEGF与TGF－fil高表达区域相吻合。4．在新生血管周围，自Iw组开始可见细胞外基质堆积，4W组可见 在新生血管周围有大量胶原沉积。结论：1．首次发现BLM损伤肺（一次给药）具有导致肺血管损伤长期难 以修复的病理改变特征。2．伴随损伤肺血管不断修复的过程，VEGF、TGF小 持续高表达 不仅可有效刺激内皮细胞的增殖，而且可以直接或间接刺激成纤 维细胞增殖和胶原过度分泌。由此可能成为肺纤维化的重要原因 之一。