【摘 要】
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为提高理行人用狂犬病灭活疫苗的保护效价与纯度,该实验,用原代地鼠肾单层细胞(PHCK)培养并收获的aG株狂犬病毒悬液,经截留分子量30万膜超过滤浓缩30-60倍后,再经Sepharose 6
【出 处】
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华西医科大学 四川大学华西医学中心 四川大学
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为提高理行人用狂犬病灭活疫苗的保护效价与纯度,该实验,用原代地鼠肾单层细胞(PHCK)培养并收获的aG株狂犬病毒悬液,经截留分子量30万膜超过滤浓缩30-60倍后,再经Sepharose 6 Fast Flow凝胶分子筛柱层析,分步收集,经小鼠脑内病毒滴定法和ELISA夹心法分别检测层析过程中狂犬病毒的毒力和病毒抗原的分布,证实完整的狂犬病毒主要存在于第I流洗峰内,并且纯毒试验测得中和指数≥1000;SDS-PAGE电泳也显示纯化病毒样品两个主要的蛋白成分GP与NP的存在.将提纯的病毒样品灭活,并制成纯化的狂犬疫苗,各项生化指标检测结果均符合现地的《中国生物制品规程》一部的要求(一九九五年版);蛋白质去除率达90%以上.平均疫苗效率回收率为51.07%.疫苗抗原比活性平均提高62.04倍.豚鼠过敏试验显示该纯化疫苗无过敏原存在,并且小鼠NIH法测得的效力基本接近于或达到WHO规定的2.5IU/ml.疫苗纯化后的效价为原制疫苗的6-12倍.综上所述,超过滤浓缩和凝胶分子筛柱层析技术,用于纯化现行地鼠肾细胞狂犬疫苗是可行的,不仅能有效提高疫苗效力,而且能大大改善疫苗的纯度.
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