【摘 要】
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中枢神经系统（CNS）感染性疾病是由细菌、病毒、真菌等病原体侵犯CNS的脑膜、实质、血管导致的急性或慢性炎症（非炎症性）疾病。这些疾病普遍具有较高的发病率和死亡率,所以及时发现和治疗对于患者的生存至关重要。目前临床上常用的检测方法包括培养法、镜检法、免疫学方法等具有一定的局限性,检测灵敏度低或检测时间长等。本研究建立了一种方便、快速、灵敏度高的CNS感染性疾病常见38种病原体多重荧光定量PCR（M
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中枢神经系统（CNS）感染性疾病是由细菌、病毒、真菌等病原体侵犯CNS的脑膜、实质、血管导致的急性或慢性炎症（非炎症性）疾病。这些疾病普遍具有较高的发病率和死亡率,所以及时发现和治疗对于患者的生存至关重要。目前临床上常用的检测方法包括培养法、镜检法、免疫学方法等具有一定的局限性,检测灵敏度低或检测时间长等。本研究建立了一种方便、快速、灵敏度高的CNS感染性疾病常见38种病原体多重荧光定量PCR（Mq PCR）检测方法,并对Mq PCR方法进行灵敏度、特异性、重复性和准确性的评价。其次对云南省儿童群体疑似中枢神经系统感染性疾病患者的脑脊液样本进行Mq PCR检测,对云南省儿童CNS感染性疾病常见病原体进行统计分析。最后对云南省儿童脑脊液样本中检出率最高的肠道病毒（EV）进行血清型分型。主要研究结果如下:确定了CNS感染性疾病常见的38种病原体,其中14种病毒包括DNA病毒有:EBV、HHV6、SV40、HSV-2、HSV-1、VZV、JCV、CMV、ADV、BKV,RNA病毒有:ECHO、JEV、CVA16、EV;16种细菌包括鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、表皮葡萄球菌、单核李斯特菌、脑膜炎奈瑟菌、伤寒沙门氏菌、诺卡菌、流感嗜血杆菌、粪肠球菌、溶血性葡萄球菌、中间链球菌、嗜麦芽窄食单胞菌、B-溶血性链球菌;4种真菌包括新型隐球菌、曲霉属、白色念珠菌、近平滑念珠菌;此外还有钩端螺旋体、伤寒立克次氏体、弓形虫和解脲脲原体。对CNS感染中常见的38种病原体进行Mq PCR分组,共分为11组,其中DNA病原体9组,RNA病原体2组。对Mq PCR方法进行特异性评价发现每组病原体与其他组外病原体之间均无交叉反应,各组病原体的特异性良好;灵敏度评价发现单纯疱疹病毒6型、BK多瘤病毒、解脲脲原体、腺病毒和JC多瘤病毒的灵敏度达到100 copies/μL量级,另外其他33种病原体的灵敏度均达到10copies/μL量级,灵敏度很高;对该方法进行重复性评价发现各组病原体在批间和批内的变异系数（CV）均小于5,重复性良好;通过检测30例脑脊液临床样本进行Mq PCR准确性评价,结果发现Mq PCR方法准确性良好。收集到云南省儿童疑似中枢神经系统感染性疾病患者的237例临床脑脊液样本,这些样本中男性占54%,女性占46%,其中(0-2]岁年龄组占比最高达到29.54%;对这些样本进行Mq PCR检测,检测出14种病原体,包括8种细菌、3种病毒、2种真菌和1种寄生虫,共90例阳性,阳性检出率达到37.97%;检出率最高的前三种病原体分别是肠道病毒（EV）、嗜麦芽窄食单胞菌、表皮葡萄球菌。本研究从237例云南省儿童疑似中枢神经系统感染性疾病患者中共检测到57例肠道病毒阳性病例,这些样本中男性占55.56%,女性占44.44%,其中(6-8]岁年龄组占比最高达到29.63%;对57例阳性进行巢式PCR扩增分型,成功分型的有35例,共检测到10种血清型,其中E11是最常见血清型检出率25.71%,其次是E6（17.14%）和E21（14.29%）,所有的血清型都属于EV-B种。综上所述,本论文建立一种方便、快速、灵敏度高的CNS感染性疾病常见病原体Mq PCR检测方法;对云南省儿童疑似CNS感染性疾病患者中常见病原体进行检测,建立云南省儿童CNS感染性疾病病原谱;并且对检出的肠道病毒血清型分型,为临床中枢神经系统感染性疾病的预防和控制提供理论基础。
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