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目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。全世界每年大约有120万的女性患有乳腺癌，50万女性因此病死亡。据统计，北美和欧洲等发达国家是乳腺癌的高发区，美国妇女9个人中将有1人在一生中患乳腺癌。虽然亚洲是乳腺癌的低发区，但乳腺癌的发病率是逐年增高，随着健康体检和自身检查意识增强，乳腺癌有年轻化趋势。乳腺癌是一种复杂的全身性疾病，多种因素参与到乳腺癌的发生及发展中。乳腺细胞的癌变、进展以及转移的过程有多种信号传导通路参与其中，包括研究较多的雌激素受体(ER)传导通路，人表皮生长因子受体2(HER2)信号传导通路等，通过研究这些信号传导通路，人们发现了多种抗肿瘤的药物来拮抗这些信号通路中某个节点来治疗乳腺癌，比如内分泌药物和赫赛汀等靶向药物。因此影响乳腺癌发生发展的信号通路中的细胞因子是近年来研究的热点。 Tuftelin1(TUFT1)是一种酸性蛋白，最初在牙釉质中被发现，其参与脊椎动物牙釉质的矿化过程。TUFT1在桑椹胚、胚胎干细胞、软组织（大脑，尤其是神经元）、肾脏、肾上腺、肝、睾丸和肿瘤细胞中都有表达，可能与这些组织、器官的生物学功能相关。据报道，TUFT1可能参与间充质干细胞的某些功能，并参与神经生长因子介导的神经细胞的分化。此外，一项研究发现，用在1％O2的条件下培养人类肝癌HepG2和乳腺癌MCF-7细胞可以诱导TUFT1的表达，而低氧环境对肿瘤的生长是必要的，从而间接表明TUFT1可能对这两种癌细胞的生长具有促进作用。这些研究的结果表明，TUFT1在不同的组织中可能具有多种功能，这些正常功能的改变可以促进某些疾病和肿瘤的发生。然而，TUFT1在乳腺癌中的作用尚未见报导。 我们从TCGA数据库中分析乳腺癌中具有大样本临床相关性的表达差异基因，发现TUFT1在乳腺癌组织中表达量较癌旁组织显著上升;并且通过Real-time PCR检测，我们发现MCF-7、T-47D和MDA-MB-231乳腺癌细胞中都表达TUFT1。因此本研究拟以乳腺癌为研究对象，研究分析TUFT1在乳腺癌组织中的表达情况，与患者预后的关系，对乳腺癌细胞株生长、增殖、凋亡的影响并分析下游可能的信号传导通路。旨在初步揭示TUFT1在乳腺癌中的作用机制，为今后乳腺癌的治疗提供新思路。 研究方法: 一、TUFT1在乳腺癌患者标本中的表达情况的实验研究 1、免疫组化实验验证TUFT1在乳腺癌中的表达情况 2、分析TUFT1与乳腺癌患者肿瘤大小、组织分级及腋窝淋巴结转移等之间的关系 3、分析TUFT1与乳腺癌患者预后的关系 二、TUFT1在乳腺癌细胞株中功能性促癌作用的实验研究 1、TUFT1-siRNA靶点设计、病毒载体的构建及慢病毒的包装 2、慢病毒感染乳腺癌T-47D和MDA-MB-231细胞株 3、qPCR和蛋白免疫印迹分别检测mRNA水平及蛋白水平TUFT1的敲减效率 4、Cellomics细胞计数检测细胞生长 5、MTT检测细胞增值 6、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡 二、TUFT1在乳腺癌细胞中相关信号通路机制的实验研究 1、PathArray下游基因筛选 2、相关信号通路中与TUFT1表达相关基因的蛋白验证 结果: 一、TUFT1在乳腺癌患者标本中的表达情况的实验研究 1、免疫组化实验证实TUFT1在乳腺癌中高表达 2、TUFT1高表达与乳腺癌患者肿瘤大小、组织分级及腋窝淋巴结转移之间呈正相关 3、TUFT1高表达与乳腺癌患者预后呈负相关 二、TUFT1在乳腺癌细胞株中功能性促癌作用的实验研究 1、慢病毒感染乳腺癌T-47D和MDA-MB-231细胞后，TUFT1基因和蛋白水平的表达量降低 2、TUFT1表达下调可以降低乳腺癌T-47D和MDA-MB-231细胞的增殖 3、TUFT1表达下调影响乳腺癌T-47D和MDA-MB-231细胞周期的变化 4、TUFT1表达下调诱导乳腺癌T-47D和MDA-MB-231细胞凋亡 三、TUFT1在乳腺癌细胞中相关信号通路机制的实验研究 1、PathArray下游基因筛选出与TUFT1相关的1095个差异显著的基因 2、通过蛋白验证发现TUFT1下调可以引起RelA，Caspase3，DUSP1，RAC1和ZAK的蛋白表达变化 结论: 1、TUFT1在乳腺癌中高表达并影响乳腺癌患者预后 2、抑制TUFT1表达可以抑制乳腺癌细胞增殖、影响细胞周期并诱导凋亡 3、抑制TUFT1表达引起下游RelA，Caspase3，DUSP1，RAC1和ZAK的蛋白表达变化