胚胎干细胞在体外培养能维持未分化状态，并具分化成所有谱系细胞的能力，所以可作为细胞替代治疗的重要来源。近来，胚胎干细胞的研究多集中于自我更新机制和诱导分化。本研究检测了猕猴胚胎干细胞R366.4在分化过程中标志物的变化，并延长培养时间，结合不含bFGF的B27无血清培养，诱导R366.4细胞向神经前体细胞分化。 采用碱性磷酸酶活性检测、RT-PCR以及测定细胞倍增时间等方法，来检测R366.4细胞不同分化时相标志物的变化。Nanog表达时间最短，Oct4、Sox2和Tert的表达时间较长，而仅在细胞分化后才能检测到CGα；碱性磷酸酶活性在细胞开始分化时显弱阳性，完全分化时显阴性； R366.4细胞在分化被启动时，倍增时间异常。综合碱性磷酸酶活性、RT-PCR和细胞倍增时间等检测方法，可快捷地确定R366.4细胞的分化情况。 延长拟胚体培养时间，用不含bFGF的B27无血清神经诱导培养基培养R366.4细胞。通过免疫荧光和RT-PCR的方法，分析诱导过程中的神经前体细胞。经过7天的神经诱导，由R366.4细胞形成的Rosette结构有85％的Nestin和88％的Sox2阳性细胞，同时有96％的Vimentin细胞和95％的Musashi细胞。RT-PCR结果显示Rosette结构在mRNA水平上Nestin表达量高，但不表达Oct4。用不含bFGF的B27无血清培养基，培养由Rosette结构形成的神经球2周，免疫荧光检测约有65％的细胞β-tubulin Ⅲ阳性，30％的细胞表达GFAP，5％的细胞表达O1。此结果显示在诱导R366.4．细胞分化成神经前体细胞的早期，bFGF可能并非必需。 本文为研究胚胎干细胞自我更新机制和诱导分化提供了重要的基础。