目的:利用反向PCR(inverse-PCR)方法精确定位人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区对脱氧核糖核酸酶I(DNase I)酶切敏感位点,探讨此方法在研究肿瘤细胞基因调控方面应用的可行性。方法:以人结肠癌细胞系SW480为研究模型,细胞培养数量达到107时提取细胞核,10U/ml DNase I切割SW480细胞核中的染色质后,按照苯酚/氯仿/异戊醇(10:10:1)方法提取基因组,用限制性内切酶Eco RI和Xmal I片段化基因组,通过末端补平、T4连接酶连接成环等过程,利用反向PCR扩增产物,并将PCR产物经纯化后连入p MD-18 T载体,转入到大肠杆菌TOP10株中进行表达,筛选阳性克隆进行基因测序。结果:通过测序,人结肠癌SW480细胞CD133基因转录起始点上游9个DNase I高敏感位点被鉴别出来,它们位于第一个外显子-700~-300bp碱基区域内。结论:应用反向PCR的技术可以精确测定DNase I对人结肠癌SW480细胞CD133基因启动子区的剪切位点,而且这些位点聚集在一个特定的区域。