实验目的创伤性骨髓炎目前是临床最具挑战性的课题之一。随生产工具和交通工具的进步,高能量创伤逐步增加,伴有软组织损伤、缺损的开放性骨折不断骤升,其创面被微生物污染,首先形成创面局部感染,最终导致慢性骨髓炎,骨折不愈合。开放性骨折早期正确的创面处理对预防骨髓炎的发生至关重要。臭氧有极好的抗感染和促进创面愈合作用,但同时臭氧也有极强的氧化性,导致毒性反应发生,严重限制了其临床应用,探索研究臭氧在创面处理中合理的应用方法,扬长避短,有望达到预防骨髓炎目的。实验方法第一部分：臭氧水局部应用,对清洁创面的作用。以臭氧水为冲洗液,对新鲜清洁的创面进行间断负压冲洗引流,对照组设置为生理盐水的间断负压冲洗引流,两者对比观察臭氧水对创面愈合的促进作用。第二部分：不同浓度的臭氧水对局部组织的安全性。以不同浓度的臭氧水采用负压冲洗引流的方式作用于创面,观察创面内肌肉和神经的组织学变化和功能学变化,以了解臭氧水对创面局部组织的损伤作用。第三部分：臭氧水局部应用,对感染创面细菌的清除。首先建立大鼠下肢开放性粉碎性骨折伴感染的动物模型,对感染的创面进行臭氧水负压冲洗引流,最后检测创面内组织的微生物学变化,以了解臭氧水对感染创面的抗感染作用。结果第一部分：1.创面干燥,局部无渗出,无肿胀。不发红,创面明显缩小。2.对实验组和对照组的创面生长的面积之间采用t检验进行两组样本均数比较,P=0.0047<0.05,具有统计学意义。可以认为进行臭氧水负压冲洗引流,臭氧本身具有促进创面上皮化加快,促进创面愈合的作用。3.创面周围皮下血管增生明显,创面周围组织内无明显的炎性细胞浸润。第二部分：应用浓度的臭氧水采用负压冲洗引流的方法冲洗创面,在冲洗前后,和生理盐水对照方面均未见神经电生理改变。随时间的延长,创面表面被臭氧氧化后,肌肉颜色逐渐变得深暗,但创面清洁,无明显渗出。30分钟内肌电图正常,无改变,60分钟时发生肌电图动作电位波幅降低,潜伏期延长。电镜结果30分钟内,肌肉电镜检查显示：已经出现少部分的肌节损害,具体表现在肌原纤维断裂,“Z”线消失,为细胞基质所代替。60分钟时,可见大量的肌原纤维断裂,肌节排列紊乱,“Z”线消失更为普遍,胞质中大量的线粒体空泡化,线粒体嵴小时,并出现多量的髓样小体,巨型线粒体出现,部分线粒体长轴和肌节等长。有髓神经纤维髓鞘变形,少量的鞘膜损伤离断,轴突内出现髓样小体,线粒体空泡化,微管,微丝排列紊乱,雪旺氏细胞胞体及胞核变化不明显。髓鞘细,厚度薄的鞘膜损伤较为轻。无髓神经纤维变化较轻。有髓神经纤维髓鞘变形更为普遍,更加明显,出现多量的鞘膜损伤离断,并出现层间解离,鞘膜重组,膜泡小体。轴突内髓样小体,线粒体空泡化,微管,微丝排列紊乱更加明显,雪旺氏细胞胞体及胞核变化不明显。髓鞘细,厚度薄的鞘膜损伤较为轻。无髓神经纤维变化较轻。第三部分：1.造模创面周围红肿,有脓性分泌物,患肢体肿胀明显。2.造模创面表面金黄色葡萄球菌定性检测阳性率达到100%。3.软组织的金黄色葡萄球菌达到3.26±1.99×105 CFU／g,达到软组织感染标准。4.骨组织中的金黄色葡萄球菌达到5.05±3.83×105 CFU／g,达到骨感染标准。5.经臭氧负压冲洗引流,创面清洁,无脓性分泌物,肉芽生长好。6.经臭氧负压冲洗引流,创面表面金黄色葡萄球菌定性检测未见菌落。7.经臭氧负压冲洗引流,创面局部组织中未检测到金黄色葡萄球。结论第一部分：2～4mg／L的臭氧水局部负压冲洗引流创面,臭氧本身具有减轻创面局部的炎症反应,促进创面周围血管增生,加快创面上皮化的速度,促进创面愈合作用。第二部分：。高浓度的臭氧,随时间的延长,对周围组织的强氧化毒性逐渐增加,在浓度低于26mg／L-33 mg／L,时间60分钟以内,不会出现功能性神经的损伤,治疗浓度的臭氧水,局部负压冲洗引流治疗,由于其浓度和作用时间远远低于产生毒性的界限,因此可以认为其临床应用是安全的。第三部分：臭氧水负压冲洗引流感染创面,能有效的清除创面内的金黄色葡萄球菌,在创面的处理中起到抗感染的作用。臭氧水结合负压引流装置,对创面进行负压冲洗引流,能够实现创面早期覆盖,清除创面的微生物感染,促进创面的愈合,从而达到预防骨髓炎发生的目的。