【摘 要】
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目的：探讨苯海索(Trihexyphenidyl，THY)对Aβ25-35(β-淀粉样蛋白25-35，beta-amyloidprotein25-35)介导的PC12细胞(大鼠嗜铬细胞瘤细胞，pheochromocytomacell)损伤的保护作用及其可能机制。 方法：运用不同浓度的Aβ25-35(1，10，20，30，50μM)对PC12细胞进行损伤，通过MTT法了解PC12细胞的损伤情况，确定出引起细胞损伤的最佳作用浓度，研究苯海索和对照品维生素E的细胞保护作用；采用MDA，SOD以及GSH
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目的：探讨苯海索(Trihexyphenidyl，THY)对Aβ25-35(β-淀粉样蛋白25-35，beta-amyloidprotein25-35)介导的PC12细胞(大鼠嗜铬细胞瘤细胞，pheochromocytomacell)损伤的保护作用及其可能机制。 方法：运用不同浓度的Aβ25-35(1，10，20，30，50μM)对PC12细胞进行损伤，通过MTT法了解PC12细胞的损伤情况，确定出引起细胞损伤的最佳作用浓度，研究苯海索和对照品维生素E的细胞保护作用；采用MDA，SOD以及GSH-PX等试剂盒检测Aβ25-35对PC12细胞的氧化损伤，并研究苯海索的抗氧化作用及其机制，为进一步确定苯海索的抗氧化特性，使用DCFH-DA结合荧光分光光度计检测细胞内ROS的水平；采用吖啶橙染色和荧光倒置显微镜观察PC12细胞凋亡形态，用荧光分光光度计结合Rh123检测细胞线粒体膜电位的水平变化，并用钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM检测细胞内游离Ca2+浓度进一步研究苯海索的钙拮抗作用。 结果：1，10μM的凝聚态Aβ25-35与PC12细胞共同孵育48小时可造成显著损伤，而浓度为0.01μM，0.1μM，1μM的苯海索可明显改善细胞形态，显著提高PC12细胞的存活率，分别达到70.41％，73.46％，86.66％，且呈浓度依赖性。2，Aβ25-35可诱导PC12细胞氧化损伤，提高细胞内ROS水平，显著降低细胞内SOD和GSH-PX酶的活性，提高MDA的含量，触发细胞内的氧化应激损伤，苯海索可显著降低细胞内ROS水平和MDA含量，显著升高细胞内SOD和GSH-PX的活性，对PC12细胞有显著的抗氧化作用。3，荧光倒置显微镜观察发现，10μM的Aβ25-35与PC12细胞共同孵育24小时，凋亡细胞显著增加，不同浓度的苯海索预处理1小时，可使细胞形态明显改善；通过测定细胞内荧光染料罗丹明123(Rh123)的荧光强度反映细胞线粒体膜电位的变化，不同浓度的苯海索可显著抑制Aβ25-35引起的线粒体膜电位水平的降低；通过检测细胞内游离Ca2+浓度的变化表明苯海索可显著抑制Ap25-35介导的细胞内Ca2+超载。 结论：1，10μM的Aβ25-35可介导PC12细胞损伤，触发氧化应激反应，诱导细胞凋亡，引发细胞内Ca2+浓度超载，最终导致细胞死亡。2，不同浓度的苯海索预处理1小时可明显抑制Aβ25-35诱导的细胞损伤和凋亡。苯海索的神经保护作用可能是通过清除细胞内ROS，提高细胞内SOD和GSH-PX的活性，降低MDA的水平，抑制细胞凋亡以及细胞内Ca2+超载来实现的。苯海索可能在阿尔茨海默氏病的防治中具有潜在的应用价值。
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